细菌学中最经典的染色方法是

绪 论 第一节 细菌学的研究对象

细菌学是微生物学的一个分支学科。它主要研究细菌的类型、形态、结构、分布、生理、生物化学、生态、遗传、进化、分类及其与人类、动物、植物等相互关系的一门应用科学。细菌学的研究对象是能引起人类和动物、植物等病害的具有致病性原核细胞型微生物。它们包括细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌。

细菌(Bacteria)是生物的主要类群之一。它们多数只能在显微镜下看到，一般是单细胞，细胞结构简单，缺乏细胞核、细胞骨架以及细胞器，比如线粒体和叶绿体。由于这些特征，细菌属于原核生物（原核生物的另一类是古菌(Archaea)。或者本类群称作真细菌(Eubacteria)，而另一类为古细菌(Archaebacteria)）。与原核生物相反，具有更复杂细胞结构的生物被称为真核生物(Eukaryota 或 Eukarya)。

虽然从系统发育来看，细菌和古生菌是二种完全不同的生物类群，但它们得到了改进。

细菌学的奠基人——科赫

科赫从上述的工作结果，找到了一种方法可以很容易地将致病菌在纯培养中获得，并在不受其他细菌干扰的条件下，可以检出和识别纯培养的细菌。科赫还提出要确定某种菌可引起某种病必须具备的条件，即科赫氏

绪 论 第一节 细菌学的研究对象

细菌学是微生物学的一个分支学科。它主要研究细菌的类型、形态、结构、分布、生理、生物化学、生态、遗传、进化、分类及其与人类、动物、植物等相互关系的一门应用科学。细菌学的研究对象是能引起人类和动物、植物等病害的具有致病性原核细胞型微生物。它们包括细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌。

细菌(Bacteria)是生物的主要类群之一。它们多数只能在显微镜下看到，一般是单细胞，细胞结构简单，缺乏细胞核、细胞骨架以及细胞器，比如线粒体和叶绿体。由于这些特征，细菌属于原核生物（原核生物的另一类是古菌(Archaea)。或者本类群称作真细菌(Eubacteria)，而另一类为古细菌(Archaebacteria)）。与原核生物相反，具有更复杂细胞结构的生物被称为真核生物(Eukaryota 或 Eukarya)。

虽然从系统发育来看，细菌和古生菌是二种完全不同的生物类群，但它们得到了改进。

细菌学的奠基人——科赫

科赫从上述的工作结果，找到了一种方法可以很容易地将致病菌在纯培养中获得，并在不受其他细菌干扰的条件下，可以检出和识别纯培养的细菌。科赫还提出要确定某种菌可引起某种病必须具备的条件，即科赫氏

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分

细菌的染色方法

细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特殊染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法 )

1.革兰氏染色法:

1)器材:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液, 革兰氏碘液, 0.4 %复红乙醇液,接种环,酒精灯,载玻片等。

2)方法:先制片,接着染色。

( l ) 结晶紫染液染色1分钟, 水冲洗; ( 2 ) 革兰氏碘液色1分钟; 水冲洗;

( 3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗,吸纸吸干后镜检。 2.抗酸染色法:

1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液,石炭酸复红,3 % 的盐酸酒精,碱性美兰染液,接种环,酒精灯,载玻片等。 2)先制片,接着染色。 ( l )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟, 滴加2一3滴覆盖菌膜染色5分钟,水冲洗;( 2 ) 3 % 的盐酸酒精脱色3 0秒钟,水冲洗;

( 3 )碱性美兰复染3 0秒钟,水冲洗, 吸水纸吸干后镜检. 3.芽抱染色法:

1)器材:破伤风杆菌厌氧培养物,5 % 孔雀绿水溶液,0.5 % 沙黄水溶液,载玻片,酒精灯等。 2)先制片,接着染色。

( l ) 加孔雀绿染液2一3滴于小试管中,并使其与菌液混合均匀,然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中,加热染色15分

非发酵菌

鼻疽假单胞菌

鼻疽假单胞菌（P.Mallei）是鼻疽病的病原菌。可从患者血液、脓液、痰中分离到。

【临床意义】

对马、骡、驴的传染性很强，犬、猫、羊等都可被感染。可通过擦伤皮肤、直接接触和吸入本菌而感染。人类感染较少见，但经常与病畜接触的人也可患鼻疽病。实验室感染也可发生。

产碱假单胞菌

【临床意义】

为条件致病菌，可引起脓胸、眼部感染、脓肿等

恶臭假单胞菌

恶臭假单胞菌(P.Putida)为鱼类的一种病原菌，常可从腐败的鱼类中检出，偶尔可从尿路感染患者的尿中及血库存血中分离出来。

非发酵菌

非发酵菌（Nonfermenters）大多是条件致病菌。包括十几个菌属的数十个种别，如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、莫拉氏菌属等。

由于非发酵菌有很多菌属，每个菌属又有多个种，因此对其必须先进行初步分群，即先进行科、属的鉴别，然后再进行种间鉴别。

腐败假单胞菌

腐败假单胞菌（P.Putrefaciens）为腐物寄生菌，分布非常广泛，河水、污水、土壤、牛奶、鸡蛋等均有存在。可引起奶油、鱼、肉变质并产生H2S。

【临床意义】

本菌为条件致病菌。可引起人类中耳炎、创伤

粪便细菌学检验操作规范

实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。 一 、标本采集与运送： 1．标本采集

（1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。

（2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1～3g。液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。

（3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。

(4)容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。 2． 标本运送

（1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。如不能及时送检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。 （2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。

（3）高度怀疑霍乱弧菌感染的

粪便细菌学检验操作规范

实验室常规检查是细菌培养，沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。 一 、标本采集与运送： 1．标本采集

（1）标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。

（2）自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1～3g。液体粪便则取絮状物，一般取1～3ml，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。

（3）直肠拭子采集粪便标本，检查带菌者时可以采取肛拭（棉拭先用保存液或增菌培养基湿润），深入肛门内7~10cm除采样，不能及时接种时，应将标本放入保存液内。

(4)容器应清洁、带盖、广口的（不宜使用纸盒）、送检的标本中不能加入防腐剂。 2． 标本运送

（1）粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2h。如不能及时送检可加入pH7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24h。使用改良Cary-Blair培养基时，不能运送培养志贺氏菌的标本。 （2）直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2h。

（3）高度怀疑霍乱弧菌感染的

细菌学检验

一、名词解释 Imvic实验 Sop 基因突变 Sos显色实验 探针 芽孢

二、选择题 【A型题】

1．证明细菌具有鞭毛结构的常用方法是：E A．革兰染色法 B．抗酸染色法 C．普通琼脂培养法 D．液体培养法 E．半固体培养法

2．革兰染色法在临床上常用于： B A．鉴别细菌的血清型别 B．协助临床选择用药 C．诊断疾病 D．解释发病机制 E．判定细菌的免疫性

3．测量细菌的常用单位是：B A．mm B．μm C．nm D．pm E．

4．不属于细菌的基本结构的是：D A．细胞壁 B．细胞膜 C．细胞浆 D．细胞器 E．核质

5．细菌细胞壁的最主要成分是： B A．脂类 B．蛋白质 C．糖类 D．脂蛋白 E．***聚糖

6．不属于细胞基本结构的是： A A．鞭毛 B．中介体 C．细胞膜 D．核糖体 E．核质

7．青霉素抗菌作用的机理是： A A．干扰菌细胞壁的合成 B．破坏菌细胞壁上的磷壁酸 C．干扰菌细胞蛋白质的合成 D．破坏菌细胞膜的通透性 E．破坏菌细胞壁的多糖骨架 8．溶菌酶的杀菌机理是：E A．干扰菌细胞壁交联桥的合成 B．

1、实验室生物安全(Laboratory biosafety): 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。

2、生物安全防护基本要求

实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories） 实验对象：致病的微生物及其毒素

综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等 确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。 实验室生物安全通用原则

积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；

主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放； 尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。 3、实验室必须设有专职的生物安全负责人

实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。 生物安全等级

生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。 实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。 4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区 5、各级生物防护实验室特点 一级生物安全防护实验室 （BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，

1、实验室生物安全(Laboratory biosafety): 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。

2、生物安全防护基本要求

实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories） 实验对象：致病的微生物及其毒素

综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等 确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。 实验室生物安全通用原则

积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；

主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放； 尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。 3、实验室必须设有专职的生物安全负责人

实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。 生物安全等级

生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。 实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。 4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区 5、各级生物防护实验室特点 一级生物安全防护实验室 （BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，