公共卫生微生物采样、检测方法总结

更新时间:2023-03-09 17:13:02 阅读量: 综合文库 文档下载

说明:文章内容仅供预览,部分内容可能不全。下载后的文档,内容与下面显示的完全一致。下载之前请确认下面内容是否您想要的,是否完整无缺。

一、空气中微生物的检测方法------细菌总数

(营养琼脂,121℃高压灭菌20min,培养时间37℃,48h) 1.两种方法

(1)撞击法(二级或者六级微生物采样器) (2)自然沉降法(暴露5min)

采样:梅花布点,高度:1.2~1.5m;离墙:1m。 二、茶具微生物检验方法 (一)细菌总数

1、生理盐水的制法:将氯化钠(8.5g)溶解于蒸馏水(1000mL)中,分装到试管内,每管10mL,121℃高压灭菌20min。

2、采样:棉拭子湿润生理盐水,在茶具内、外缘涂抹50cm2,即口唇接触处一圈(1~1.5cm),用灭菌剪刀剪去棉签手接触处,将棉拭子放入10mL生理盐水中,4h内送检。 3、检验程序:

检样→各1mL加入两块灭菌平皿(若污染严重,可十倍递增稀释)→37℃,48h培养→菌落计数→报告 4、单位:cfu/cm2。 (二)大肠菌群

1、培养基:乳糖胆盐发酵培养液(双料的,每管10mL,115℃高压灭菌15min) 2、检测方法:发酵法(具体内容课本11页) 3、检样(测定细菌总数余下的样品)

4、革兰氏染色过程:(阳性菌显紫色,阴性菌显红色) (1)初染:1min,水洗; (2)碘染:1min,水洗; (3)脱色:30s,水洗;

(4)复染:1min,水洗,待干,镜检。

5、结果报告:凡乳糖发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告检出大肠菌群。

三、毛巾、床上卧具微生物检测方法 (一)细菌总数 1.采样

(1)毛巾、枕巾:对折后两面的中央各25cm2; (2)床单、被单:在上下两部中央25cm2来回涂抹; 2、检测程序同茶具细菌总数检测 3.计算单位:cfu/25cm2。

(二)大肠菌群(检测程序同茶具大肠菌群检测) 1.涂抹法:(用测定细菌总数时采集的样品) 四、理发用具微生物检验方法 (一)大肠菌群 1、采样

推子:在推子前部上下部分均匀各涂抹三次;

理发刀、剪和修脚工具:在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样;两个刀或者两个剪为一份样品。

2、检样5mL倒入双料乳糖胆盐发酵管,37℃,24h培养; 3、分离培养:接种伊红美蓝平板,做革兰氏染色镜检;

4、证实试验:接种乳糖发酵管37℃,24h培养,观察产气情况。

5、结果报告:乳糖管最终产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,可报告为大肠菌群阳性。 (二)金黄色葡萄球菌

1、培养基:7.5%的氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基 2、步骤:

(1)做大肠菌群剩余的5mL倒入培养基中,37℃,24h培养;

(2)接种血平板,37℃,24h培养;观察形状:圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圈;

(3)挑菌落做镜检:革兰氏阳性(红色),葡萄状排列;

(4)甘露醇发酵试验:接种到甘露醇发酵培养基中,37℃,24h培养,观察是否产酸;

(5)血浆凝固酶试验

玻片法:在干净的玻片两边,一端滴一滴生理盐水,一端滴一滴血浆,接种环挑菌落分别与它们混合。5min后均无凝固现象的为阴性;若血浆中出现颗粒状凝块而生理盐水中没有,则为阳性。 五、拖鞋微生物检验方法 霉菌与酵母菌

(生理盐水中要加入玻璃珠)

1.培养基:霉菌培养基、(虎红)孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 2.取样:有棉拭子在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处的5cm×5cm面积上均匀涂抹3次,一双拖鞋为一份样品;

3.将盛有棉拭子的试管在手心用力振荡100次,使霉菌孢子分开; 4.培养:在霉菌培养箱中25~28℃,培养观察一周。 5.单位是cfu/50cm2。

六、浴盆、脸(脚)盆微生物检测 (一)细菌总数

无菌生理盐水:分装125mL/瓶供浴盆采样;50mL供脸(脚)盆采样。 采样部位:在盆内侧二分之一到三分之一高度; 布点:浴盆梅花布点;脸(脚)盆相对两侧壁布点; 方法:涂抹法(与茶具方法一致) 单位:cfu/25cm2。 (二)大肠菌群(同茶具) 七、游泳池水微生物检测 (一)、细菌总数

1.采样瓶:无酸、无碱、无毒的玻璃容器。

2.灭菌前要加入足量的10%的硫代硫酸钠溶液,一般125mL水样加0.1mL。 3.采样

游泳池水 采样点数 面积,㎡ 儿童池 1~2 成人池 天然游泳池 ≦1000 >1000 ≦2500 >2500 2 3 5 >5 注:在水面下30cm处取水样450mL 4.操作步骤(与茶具细菌总数一样)

(二)大肠菌群

1.培养基:三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液(蒸馏水量不变,其他成分三倍) 2.步骤

(1)推测性试验

2个装有50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管内(装有小试管)各加入100mL的水样;在10支装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管里(装有小试管)加入10mL水样。摇匀,培养。 (2)平板分离

接种伊红美蓝,培养、观察;典型菌落形态:黑紫色或红紫色,具有金属光泽。 (3)复发酵试验

进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,培养,观察。 (4)查表:1000mL水样中大肠菌群的MPN值。 八、生活饮用水微生物检验方法 (一)采样

1.采样容器应采用洁净、无色、无毒的聚乙烯塑料和硬质玻璃(又称硼硅玻璃)。样品瓶必须专瓶专用,切不可用实验室盛装过浓溶液的瓶作采样瓶。通常我们使用500ml的高压灭菌的细口瓶采样。 2.容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度。

3.检验中所用的一切用品必须是完全灭菌的。在灭菌前应彻底洗涤干净,121℃高压蒸汽灭菌20min,或160℃干烤2h。

4.冷藏,4h内检测。如有游离余氯应在采样瓶消毒前每125ml加0.1ml硫代硫酸钠溶液。

(二)细菌总数(操作步骤同茶具,记得做空白对照) (三)总大肠菌群 1.乳糖发酵试验

(1)10mL水样加入10mL双料乳糖发酵管中;1mL水样加入10mL单料乳糖发酵管中; 0.1mL水样加到10mL单料乳糖发酵管中;每一稀释度接种5管。

(2)37℃培养24小时,观察产酸产气现象 2.分离培养(接种伊红美蓝,培养)

3.证实实验(革兰氏染色,镜检,接种乳糖发酵管) 4.结果报考:查表。 (四)耐热大肠菌群 1.培养基:EC培养基

2.操作步骤:同大肠菌群多管发酵法。 3.培养温度:44.5℃培养24h。 (五)大肠埃希氏菌

1.培养基:EC-MUG培养基(培养基加热溶解后要先在366nm紫光下检查有无荧光)

2.培养温度:44.5℃培养24h。

3.观察:在暗处用366nm的紫外灯照射,是否有蓝色荧光产生; 4.计算阳性管数,查表得出最可能数,结果以MPN/100mL报告。 九、公共场所集中空调系统

(一)冷凝水、冷却水中嗜肺军团菌 (1)采样

1.采样容器:可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶,广口瓶,用前灭菌。

2.采样量:每个采样点依无菌操作取水样(或沉积物、软泥等样品)约500ml。 3.中和:经氯或臭氧等消毒的样品,采样容器灭菌前加硫代硫酸钠溶液中和。 4.样品运输与贮存:样品最好2天内送达实验室,不必冷冻,但要避光和防止受热,室温下贮存不得超过15天。

(2)热处理:取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。

酸处理:取5ml洗脱样品,调pH至2.2,轻轻摇匀,放置5min。 (3)接种平板静置于浓度为2.5%的CO2培养箱中,35~37℃,观察到有培养物生成时,反转平板,孵育10d,注意保湿。 (4)观察

军团菌生长缓慢,易被其它菌掩盖,需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,部分有荧光。 (二)送风中细菌总数

以无菌操作,使用六级筛孔空气撞击式采样器,以空气流量为28.3L/min,在采样点采集5~15min。将采集细菌后的营养琼脂平皿置35~37℃培养48 h,计数菌落数。

(三)送风中真菌总数

采样方法同上将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5~7 d,逐日观察并于第7 d 记录结果。若真菌数量过多可于第5d 计数结果,并记录培养时间,换算成cfu/m3。

(四)送风中β-溶血性链球菌

在血琼脂平板上形成灰白色,表面凸起,直径0.5mm~0.7mm的细小菌落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光,菌落周边有溶血环;镜检为革兰氏阳性无芽孢杆菌,圆形或卵圆形,呈链状排列。 (五)风管内表面微生物检验

采样面积:每一点采样面积应为50cm2。 采样方法:刮拭法、擦拭法 细菌和真菌培养与计数方法同上

军团菌生长缓慢,易被其它菌掩盖,需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,部分有荧光。 (二)送风中细菌总数

以无菌操作,使用六级筛孔空气撞击式采样器,以空气流量为28.3L/min,在采样点采集5~15min。将采集细菌后的营养琼脂平皿置35~37℃培养48 h,计数菌落数。

(三)送风中真菌总数

采样方法同上将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5~7 d,逐日观察并于第7 d 记录结果。若真菌数量过多可于第5d 计数结果,并记录培养时间,换算成cfu/m3。

(四)送风中β-溶血性链球菌

在血琼脂平板上形成灰白色,表面凸起,直径0.5mm~0.7mm的细小菌落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光,菌落周边有溶血环;镜检为革兰氏阳性无芽孢杆菌,圆形或卵圆形,呈链状排列。 (五)风管内表面微生物检验

采样面积:每一点采样面积应为50cm2。 采样方法:刮拭法、擦拭法 细菌和真菌培养与计数方法同上

本文来源:https://www.bwwdw.com/article/gn8a.html

Top