细胞工程复习重点

思考题

1．细胞工程实验室的基本组成与要求是什么？ 一、实验室组成 1．基本实验室

①准备室/化学实验室

功能： 就是进行一切与实验有关的准备工作 要求： 宽敞明亮，通风条件好 ，地面便于 清洁并应防滑处理。 ②接种室/无菌操作室

功能： 是进行接种、继代、细胞融合等无 菌操作的场所。

要求： 封闭性好，干燥清洁明亮， 防止空 气对流。外应设缓冲室、更衣室 。 防止微生物感染。 ③培养室

功能： 是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的 场所。

要求： 是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁， 2．辅助实验室根据具体的实验需求而定。 细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室 3. 移栽设施/温室

要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为 试管苗的正常生长提供适宜的环境。 2．外植体消毒的基本方法是什么？

3. 无菌操作在植物离体培养中的作用是什么？

4. 配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质，

它们在离体培养过程中有哪些作用? 激素调控的一般规律是什么？ 植物激素或生长调节剂（ growth regulators）包 括：

? 生长素类（ auxin）

? 细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ? 赤霉素类 (GA) ? 乙烯（ Eth) ? 脱落酸(ABA)

? 其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。 ? 常用的主要有生长素类和细胞分裂素类两大类。 ①生长素类（ auxin）： 在作用或结构上 类似于吲哚乙酸的一类物质的统称。生长素 是最早发现的植物激素。 作用： 诱导愈伤组织形成，促进细胞的分裂和伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，有调运养分的效应。使用浓度0.1～10mg/L。常用的生长素有:

吲哚乙酸 (IAA)、2， 4，二氯苯氧乙酸 (2,4-D)?吲哚丁酸 (IBA) 。 奈乙酸 (NAA)、

?②细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ： 是一类促进细 胞分裂的植物激素，细胞分裂素都为腺嘌呤的衍生物 作用： 促进细胞分裂和分化，诱导不定芽的形成， 促进胚状体的发育，延缓组织的衰老，打破顶端 优势，有利于芽的增殖，常用于继代和增殖培养。 使用浓度0.1～10mg/L。 常用的细胞分裂素有： ?激动素 (KT)

?6-苄基腺嘌呤 (6-BA/BAP) ?玉米素（ ZT）

?异戊烯氨基嘌呤 (2-ip) ?噻重氮苯基脲（ TDZ）

5. 常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特 点?

MS培养基

无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也高。其养分的数量和比例较合适，离子平衡性较好，具较强的缓冲能力，培养过程中较稳定，可满足植物的营养和生理需要。其中它的硝酸盐含量较其它培养基为高。

广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 Ｎ6 培养基

ＫＮＯ3和（ＮＨ4） 2ＳＯ4 含量高，VB1含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用 于小麦、水稻及其它植物的花粉和花药培养和组织培养。 Ｂ5培养基

ＫＮＯ3含量高，有机物含量较高，但含有较低的铵，这可能对不少培养物的

生长有抑制作用。从实践得知有些植物在Ｂ5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特 别是木本植物 H培养基

大量元素约为1/2MS，微量元素减少但含量增加，维生素种类较多。用于多种植物的花药、胚培养。 Ｗhite 培养基

特点：是无机盐浓度较低，有机成分含量也相对较低。适于生根培养。 ＫＭ-８Ｐ培养基

有机成分较复杂。它包括了所有的单糖和维生素。广泛用于原生质体和融 合体的培养

6．简要说明MS培养基的基本组成。

7. 配制培养基时，为什么要先配母液?如何配制母液?

在组织培养工作中， 配制培养基是日常工作，为了简便起见， 将培养基配方中的药品配成一定倍数的浓缩液， 用时稀释， 这种浓缩液就是母液贮备液。

? 母液储备液可一次称量供一段时间使用，简单方便， 不仅可以提高培养基中微量成份称量的准确性， 还可以减少工作量， 提高效率 母液贮备液的配制要求

?①大量元素母液配制： 10x， 20x， 50x ?②微量元素母液配制： 1000x

?③铁盐母液配制： 100x或200x , 分别溶解 EDTA-Na2 与FeSO4· 4H2O，再充分混匀，贮存 在棕色瓶中

?④有机母液配制：可以分别配制100～200X，也可以混在一起配制

?⑤肌醇一般单独配置成100x。

?⑥生长调节物质配制：分别单独配制成母液，储存于冰箱。一般浓度为0.1～1 mg／ml。并注意不同激素需加入不同助溶剂 8. 如何判断配制好的培养基是否良好？ 9. 植物培养基和微生物培养基有什么不同？

第三章1．植物细胞全能性的含义是什么？其实现的途径是什么？

每个植物生活细胞无论是体细胞还是生殖细胞，均具有该物种全部的遗传信息。 每个植物生活细胞均具有发育成完整植株的潜在能力 细胞全能性仅是一种能力或可能性，不是所有具有全能性的细胞都能进行全能性的表达。 离体培养条件下，植物体细胞、性细胞、原生质体、经过遗传信息修饰的 细胞都可能实现细胞全能性

2．什么是细胞脱分化和再分化？其实现的条件是什么？ 脱分化（ dedifferentiation）：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程

再分化（Redifferentiation）：脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新回复细胞分化能力，形成各种不同类型的细胞，并经历器官发生或胚胎发生，进一步发育成完整植物体的过程

细胞脱分化的条件：创伤、外源激素

3．什么是器官发生，器官发生的方式有几种？各有什么特点？直接和间接器官发生的区别是什么？ 器官发生：是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定芽（ adventitious buds）、不定根（ adventitious roots）等器官的过程

5. 器官发生的影响因素有哪些？ 1、起始材料

?母体植株的遗传基础 ?外植体的类型

?生理状态、取材方式等 2、培养基成分

激素（ Skoog-Miller模式）、有机及无机成分 3、培养条件

光照、温度、湿度等

6．体细胞胚的概念、含义及特点是什么？

体细胞胚(somatic embryo)或胚状体（embryoid）：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发生和发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞） 体细胞胚的含义：

?在离体培养范围使用，以区别于无融合生殖胚； ?体细胞胚起源于非合子细胞，以区别于合子胚；

?体细胞经过了胚胎发育过程，以区别与离体培养中器官发生形成个体的途径 体细胞胚发生的特点 ? 具有明显的双极性：即在发育的早期阶段，从其方向相反的两端分化出茎端和根端，具有根、芽两极分化的特性； ? 存在生理隔离现象：胚状体与母体组织或与外植体的维管组织无解剖结构上的直接联系，处于相对独立的状态；

?遗传的相对稳定性：单细胞起源；发生数量大，增殖率高：可再生次级胚 7．体细胞胚发育的过程是什么？它和器官发生形成的芽、合子胚有什么区别？

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