实验五液泡系的超活染色与观察

实验五 液泡系的超活染色与观察

实验目的

一、观察动、植物活细胞内液泡系的形态、数量与分布。 二、学习液泡系的超活染色技术。

实验原理

中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

实验用品

一、器材

显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 二、试剂

1．Ringer溶液：

氯化钠 0.65g；氯化钾 0.25g；氯化钙 0.03g；蒸馏水 100 ml 2. 1%、1/3000中性红溶液

称取0.5g中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40 oC）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。（即为1%中性红原液）

临用前，取已配置的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 三、材料

青蛙（或蟾蜍）胸骨剑突软骨、绿豆根尖

实验方法

一、青蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性红染色观察

软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等，因而粗面内质网和高尔基体都发达，用中性红超活染色后，可明显地显示出液泡系。 1．将青蛙处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。 2．用吸管吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片进行观察。

3．在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。 二、绿豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察

1．实验前，把绿豆种子培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根长到1cm以上。

2．用双面刀片把初生的绿豆根尖（约1~2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。

3．吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 4．在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小炮，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化生长的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

从以上的观察结果，想想植物细胞液泡系的形态演进情况。

作业

1．绘青蛙胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布

2．高等动物和高等植物细胞中的液泡系(高尔基体)分布上有何不同?

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