流式常用荧光染料

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料

流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；

氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；

488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； PE（藻红蛋白） PI（碘化丙啶） CY5（化青素） preCP(叶绿素蛋白)

ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 激发光和发射光波长，如下：

FITC PE PI ECD CY5 PreCP 激发光波长（nm） 488 488 488 488 488 488 发射光峰值（nm） 525（绿） 575（橙红） 630（橙红） 610（红） 675（深红） 675（深红）

流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器

名 称 Ex波长(nm) Em波长(nm) 备 注 激光器 Hoechst 33342 355 Hoechst 33258 DAPI Indo-1 FITC R_PE PE_CY5 PE_CY5.5 PerCP 365 372 350 490 480 480 480 490 465 465 456 405 520 578 670 695 675 517 613 540 526 501 510 615 640 660 668 667 DNA染色 核酸标记 351nm 紫外激光器 细胞内钙离子标记 标记抗体 488nm 氩 离 子 线粒体标记 细胞内钙离子标记 内质网标记 激 光 器 Alexa Fluor 488 494 PE_Texas Red 480 Rhodamine 123 500 Fluo-3 DiOC6(3) YOYO-1 506 480 490 DNA染色 Propidium Iodide 530 Acridine Orange 490 APC 650 核酸标记 Alexa Fluor 647 650 CY5 650 标记抗体 633nm 氦氖激光器

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ml

荧光染料谱

染料名称 Excitation(nm) Emission(nm) 分子量 备注信息 Reactive and conjugated probes Hydroxycoumarin 325 386 33Succinimidyl ester 1 330 317 596 406 294 240 k NBD-X Maleimide Hydrazide Succinimidyl ester Succinimidyl ester Aminocoumarin 350 445 Methoxycoumarin 360 410 Cascade Blue (375);401 423 Pacific Blue 403 455 Pacific Orange Lucifer yellow 403 425 551 528 NBD 466 539 R-Phycoerythrin (PE) 480;565 578 480;565;6PE-Cy5 conjugates 50 480;565;7PE-Cy7 conjugates 43 480;565 490 490,675 670 aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum Red 767 Red 613 PerCP TruRed 613 675 695 587 389 444 PE-Texas Red Peridinin chlorphyll protein PerCP-Cy5.5 conjugate FluorX 494 520 GE Healthcare Fluorescein 495 519 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512 TRITC 547 572 TRITC X-Rhodamine 570 576 54XRITC 8 Lissamine Rhodamine B 589 615 625 104 k Sulfonyl chloride 570 590 Texas Red Allophycocyanin (APC) APC-Cy7 conjugates 650 660 650;755 767 PharRed Alexa Fluor系列荧光染料 410 1028 702 643 700 714 724 1079 1250 792 820 QY 0.66 QY 0.69 QY 0.1 QY 0.79 QY 0.61 QY 0.92 Alexa Fluor 350 343 442 Alexa Fluor 405 401 421 Alexa Fluor 430 434 540 Alexa Fluor 488 499 519 Alexa Fluor 500 503 525 Alexa Fluor 514 517 542 Alexa Fluor 532 530 555 Alexa Fluor 546 561 572 Alexa Fluor 555 553 568 Alexa Fluor 568 579 603 Alexa Fluor 594 591 618 Alexa Fluor 610 610 629 12

85 1200 1300 1100 1150 1400 1300 1750 QY 0.33 Alexa Fluor 633 632 648 Alexa Fluor 647 652 668 Alexa Fluor 660 663 691 Alexa Fluor 680 680 702 Alexa Fluor 700 696 719 Alexa Fluor 750 752 776 Alexa Fluor 790 782 804 Cy系列荧光染料 714 767 658 1102 792 1128 818 QY 0.28 QY 0.23 QY 0.28 QY 0.15 QY 0.67 QY 0.15 QY 0.12 Cy2 489 506 Cy3 (512);550 570;(615) Cy3B 558 572;(620) Cy3.5 581 594;(640) Cy5 (625);650 670 Cy5.5 675 694 Cy7 743 767 核酸相关探针染料 Hoechst 33342 343 483 616 624 ~400 1271 394 ~600 DNA DNA AT-selective AT-selective DAPI 345 455 AT-selective Hoechst 33258 345 478 SYTOX Blue 431 480 Chromomycin A3 Mithramycin 445 445 575 575 CG-selective YOYO-1 491 509 Ethidium Bromide 493 620 Acridine Orange 503 530/640 DNA/RNA SYTOX Green 504 523 TOTO-1, TO-PRO-1 509 533 Vital stain, TOTO: Cyanine Dimer TO-PRO: Cyanine Monomer Thiazole Orange 510 530 668.4 472 ~500 413 Propidium Iodide (PI) 536 617 LDS 751 543;590 712;607 DNA (543ex/712em), RNA (590ex/607em) 7-AAD 546 647 7-aminoactinomycin D, CG-selective SYTOX Orange 547 570 DNA TOTO-3, TO-PRO-3 642 661 DRAQ5 647 681,697 usable excitation down to 488 细胞功能探针 Indo-1 361/330 490/405 1010 855 529 346 2'7'Dichorodihydrofluorescein, oxidized form AM ester. pH > 6 AM ester. Low/High Ca++, Fluo-3 506 526 DCFH 505 535 DHR 505 534 Dihydrorhodamine 123, oxidized form, light catalyzes oxidation SNARF 荧光蛋白 Y66H Y66F 548/579 587/635 pH 6/9 360 360 442 508 QY 0.18 BR 0.27 20 15 26 0.27 0.13 0.PS EBFP 380 440 monomer EBFP2 383 448 monomer Azurite 383 447 monomer GFPuv 385 508 0.60 25 36 64 monomer weak dimer weak dimer T-Sapphire 399 511 Cerulean 433 475 62 mCFP 433 475 40 ECFP 434 477 15 0.51 8 3 CyPet 435 477 19 5weak dimer Y66W 436 485 mKeima-Red 440 620 0.24 3 monomer TagCFP 458 480 29 29 54 25 dimer AmCyan1 458 489 0.75 tetramer mTFP1 462 492 dimer S65A 471 504 0.9 0.77 Midoriishi Cyan 472 495 dimer Wild Type GFP 396,475 508 26k 26 k 53 S65C 479 507 0.7 3 TurboGFP 482 502 dimer TagGFP 482 505 34 39 69 34 74 41 monomer S65L 484 510 0.68 0.60 0.74 0.91 0 0.weak dimer; (Invitrogen) 1weak dimer Emerald 487 509 S65T 488 511 26k EGFP 488 507 Azami Green 492 505 monomer ZsGreen1 493 505 105k 4 tetramer TagYFP 508 524 47 monomer EYFP 514 527 260.56weak dimer k 61 1 57 53 0.59 0.80 0.1.65 0.13 0.31 0.49 0.31 0.62 0.95 50 3.5 0.24 0.26 0 Topaz 514 527 monomer Venus 515 528 0.57 15 49 49 weak dimer monomer weak dimer mCitrine 516 529 76 YPet 517 530 77 TurboYFP 525 538 26 k 53 dimer ZsYellow1 529 539 65 tetramer Kusabira Orange 548 559 60 monomer mOrange 548 562 69 9 monomer mKO 548 559 122 monomer 60 TurboRFP 553 574 26 k 67 dimer tdTomato 554 581 98 tandem dimer 69 TagRFP 555 584 monomer DsRed monomer 556 586 ~28k ~110k 55 1 0.16 monomer DsRed2 (\563 582 mStrawberry 574 596 15 monomer 29 TurboFP602 574 602 26 0.2 dimer k ~110k ~30k 35 0.21 0.25 0.20 0.22 0.03 6 13 AsRed2 576 592 tetramer mRFP1 584 607 monomer J-Red 584 610 8.8 16 0.6 23 15 22 6 3 1dimer mCherry 587 610 9monomer HcRed1 588 618 ~52k dimer Katusha 588 635 dimer mKate (TagFP635) 588 635 monomer TurboFP635 588 635 26 k 34 0. dimer mPlum 590 649 0.10 1 4.3 5 monomer; mRaspberry 598 625 0.15 3 1 faster photobleach than mPlum 其他探针 380 461 226 623 pH > 5 Glutathione probe Monochlorobimane Calcein 496 517

k ~110k ~30k 35 0.21 0.25 0.20 0.22 0.03 6 13 AsRed2 576 592 tetramer mRFP1 584 607 monomer J-Red 584 610 8.8 16 0.6 23 15 22 6 3 1dimer mCherry 587 610 9monomer HcRed1 588 618 ~52k dimer Katusha 588 635 dimer mKate (TagFP635) 588 635 monomer TurboFP635 588 635 26 k 34 0. dimer mPlum 590 649 0.10 1 4.3 5 monomer; mRaspberry 598 625 0.15 3 1 faster photobleach than mPlum 其他探针 380 461 226 623 pH > 5 Glutathione probe Monochlorobimane Calcein 496 517

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