高级生化思考题

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第一章 概论

生物分子提取和纯化的一般过程？ 细胞破碎的方法？

抽提有效成分的影响因子：

生物大分子常用的浓缩纯化方法？ 纯化方案的评价指标是什么？

生物分离技术（纯化方案）设计的基本原则是什么？ 纯化生物产品的总收率是如何计算的？

第二章 沉淀法

1. 蛋白质沉淀方法有哪些？ 2. 盐析的概念及机理是什么？ 3. 硫酸铵饱和度：

4. 影响盐析的因素有哪些？ 5. 硫酸铵盐析的方法有哪几种？ 6. 盐析常数（Ks）： 7. 常用的脱盐方法： 8. 透析法注意事项：

9. 有机溶液能降低蛋白质溶解的原理： 10. 用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

第三章 吸附层析

1. 吸附层析分离物质的基本原理： 2. 吸附层析常用的吸附剂的种类： 3. 吸附剂的选择： 4. 羟基磷灰石(HA) ： 5. 硅胶吸附剂： 6. 洗脱剂符合条件： 7. 柱层析的设备：

8. 柱层析操作的一般过程：

9. 核酸在HA层析柱上分离的次序是双链RNA、杂链RNA、双链DNA，为什么？ 10. 薄层层析(TLC)：

第四章 离子交换层析

1.离子交换剂有哪几部分组成？何为阳离子和阴离子交换剂？ 2.影响离子交换选择性的因素： 3.常用的离子交换剂应满足的要求？ 4.常用离子交换剂的分类？ 5.常用的离子交换剂的载体有：

6.影响离子交换剂膨胀度的因子有哪些？哪个是关键因子？为什么？ 7.离子交换层析中，以0.1-0.5mol/L的NaCl梯度的缓冲液洗脱（总体积200mL，梯度瓶直径相同），通过层析柱75mL时， NaCl浓度是多少？0.25 mol/L

8.现有肌苷样品溶液100mL，浓度为2mol/L，若每克干树脂总交换容量为3.5mmol，而实际交换容量是总交换容量的5%，问大约需要多少树脂？200/3.5=57.1 /0.05=1143g

第五章 凝胶过滤层析

1. 凝胶层析：

2. 凝胶过滤层析分离大分子物质的机制是什么？ 3. 凝胶过滤的特点：

4. 用凝胶过滤层析法测定分子质量的局限性：

5. 分子质量为8×104和10×104的蛋白质能否在SephadexG-75柱中分开？为什么？ （SephadexG-75的分离范围为3000 -70000） 6. 制备合格的凝胶柱应注意哪几点？

7. 概述哪些因子影响凝胶层析的分辨率？为什么？

第六章 亲和层析

1. 亲和层析：以亲和吸附剂为固定相，以特异性溶液为流动相。在亲和层析中所用的配体分为特异性的和通用性的两大类，所以又将此层析法分为特异性配体亲和层析法和通用性配体亲和层析法。 2. 亲和层析原理： 3. 配体的选择原则：

4. 理想的载体（基质）应满足的要求？ 5. 提高吸附剂的操作容量的方法？

6. 亲和层析特异性吸附的影响因素有哪些？

7. 亲和层析操作洗脱时，根据亲和力大小的不同，如何选择洗脱液？

第七章 电泳

1. 电泳是带电颗粒在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的现象 2. 影响带电颗粒在电场中泳动速度的因子有哪些？ 3. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳基本原理： 4. 什么是不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳？

5. 为什么聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂电泳分辨率高？PAGE胶孔比琼脂电泳胶

孔小

6. 凝胶电泳有哪些用途？用它怎样鉴定样品纯度？

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