分子实验常用试剂、缓冲液配制

分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） 配制量 1L

配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl 组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L

配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） 配制量 1L

配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL

2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） 配制量 100mL

配置方法 1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g

KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 100mL

配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法

1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。

③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④ 重复操作步骤③。

⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇 配置方法

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS 组份浓度 10％（W/V）SDS 配制量 100mL

配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 10、2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100mL

配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。 12、5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl 配制量 1L

配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose 组份浓度 20％（W/V）Glucose 配制量 100mL

配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100mL。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

14、Solution I 组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （质粒提取用） 配制量 1L

配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL

0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL 20％Glucose（1.11M） 45mL

dH2O 910mL 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。 15、Solution II 组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用） 配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、Solution III 组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） 配制量 500mL

配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 17、0.5M EDTA 组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0) 配制量 1L

配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。 18、1 M DTT 组份浓度 1 M DTT 配制量 20mL

配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。

2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。 19、10mM ATP 组份浓度 10mM ATP 配制量 20mL

配置方法 1. 称取121mg Na2ATP?3H2O，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin 组份浓度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml） 配制量 50mL

配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。

2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG 组份浓度 24mg/mL IPTG （24mg/mL） 配制量 50mL

配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。

2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal 组份浓度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL） 配制量 50mL

配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。

2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基 组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl

配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 5、LB/Amp培养基 组份浓度 1％（W/V） Tryptone

0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。

6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。 6、TB培养基 组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone

2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 配制量 1L

配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL

3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 4℃保存。

7、TB/Apm培养基 组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone

2.4％（W/V） Yeast Extract

0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基 组份浓度 2％（W/V） Tryptone

0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 配制量 1L 配置方法

1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。

2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。

9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。

9、SOC培养基 组份浓度 2％（W/V） Tryptone

0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 配制量 100mL 配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过

滤除菌。

2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。 3. 4℃保存。

10、2×YT培养基 组份浓度 1.6％（W/V）Tryptone， 1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。

11、Φb×broth培养基 组份浓度 2％（W/V）Tryptone， 0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4?7H2O

配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4?7H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。

4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。

12、NZCYM培养基 组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract

0.1％（W/V） Casamino Acid 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl

0.2％（W /V） MgSO4?7H2O 配制量 1L

配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4?7H2O 2g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。

13、NZYM培养基 组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract

1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl

0.2％（W /V） MgSO4?7H2O

配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。 14、NZM培养基 组份浓度 1％（W /V） NZ胺

0.5％（W /V） NaCl

0.2％（W /V） MgSO4?7H2O 配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。 15、一般固体培养基的 配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7g/L

2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。 4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1％（W /V） Tryptone 平板培养基 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5％（W /V） IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar 配制量 1L 配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 10g

Yeast Extract 5g NaCl 10g

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。 17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1.2％（W /V） Tryptone

平板培养基 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（W/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin

0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar 配制量 1L

配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone 12g

Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。 生物化学实验常用试剂的配制方法

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 组份浓度 0.5mol/L

配制量 2L 配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 组份浓度 0.5mol/L

配制量 2L 配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。 4、0.2％葡萄糖标准溶液 组份浓度 0.2％

配制量 1L 配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清 组份浓度 250μg/mL 白蛋白标准液 配制量 2L 配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4℃保存。 6、Folin试剂甲

配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，

加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。 2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中， 加入0.25g硫酸铜?5水，溶解。 3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。

4. 4℃保存，可用一周。 7、Folin试剂乙 配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g，

钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL， 浓盐酸25mL，充分混合。

2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。 3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。 4.于棕色瓶中保存，可使用多年

注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。 8、DNS试剂

配置方法 1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂）

2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。 3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。 9、5％蔗糖溶液 组份浓度 5％

配制量 1L 配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。 10、0.1mol/L蔗糖溶液 组份浓度 0.1mol/L

配制量 1L

配置方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。

11、20％乙酸溶液 组份浓度 20％

配制量 1.2L 配置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。 12、30％（W/V）Acrylamide

组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％ 配制量 1L

配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Acrylamide 290g

BIS 10g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 13、40％（W/V）Acrylamide

组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％ 配制量 1L

配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Acrylamide 380g BIS 20g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 14、10％（W/V）过硫酸铵 组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 配制量 10mL

配置方法 1.称取1g过硫酸铵。

2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4℃。

注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。 15、考马斯亮蓝R-250染色液

组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇，

配制量 1L 配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。

2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。 4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。 5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。 16、考马斯亮蓝染色脱色液

组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 配制量 1L

配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。 17、凝胶固定液

组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸 (SDS-PAGE银氨染色用) 配制量 100L 配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

甲醇 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2.均匀混合后室温保存。 18、凝胶处理液

组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛 (SDS-PAGE银氨染色用) 配制量 1L

10％（V/V）冰醋酸 配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

甲醇 50mL 戊二醛 10mL dH2O 40mL 2. 均匀混合后室温保存。 19、凝胶染色液

组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水， (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠

配制量 100L 配置方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。 20％硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4％氢氧化钠 1mL

dH2O 96mL 2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。 3.本染色液应现用现配，不宜保存。 20、显影液

组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛 (SDS-PAGE银氨染色用) 配制量 1L

配置方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。

50mg

0.2mL

2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。 3.室温保存。 21、45％乙醇溶液 组份浓度 45％

配制量 1L 配置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。 22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 组份浓度 5％

（W/V） 配制量 0.1L 配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。 23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂

配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。 24、1.6％乙醛溶液 组份浓度 1.6％

配制量 0.1L 配置方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。 25、二苯胺试剂

配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中， 2.再加入8mL高氯酸混匀。

3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。 注意：配制完成后试剂应为无色。 26、15％三氯乙酸溶液 组份浓度 15％

柠檬酸 甲醛 配制量 2L 配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 27、1％谷氨酸溶液 组份浓度 1％

配制量 0.5L 配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 28、1％丙酮酸溶液 组份浓度 1％

配制量 0.5L 配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 29、0.1％的碳酸氢钾溶液 组份浓度 0.1％

配制量 0.5L 配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。 30、0.05％的碘乙酸溶液 组份浓度 0.05％

配制量 0.25L 配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。 31、Locke氏溶液 配制量 2L 配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸 氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。 32、0.2mol/L的丁酸溶液 组份浓度 0.2mol/L

配制量 1L 配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。

2.用1mol/L的氢氧化钠中和。 3.再用去离子水定容至1L。 33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 组份浓度 0.1mol/L

配制量 配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。 34、0.1mol/L的碘溶液 组份浓度 0.1mol/L

配制量 1L 配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。

2.用去离子水溶解并定容至1L。

3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 35、10％氢氧化钠溶液 组份浓度 10％

配制量 2L 配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。 36、10％盐酸溶液 组份浓度 10％

配制量 0.2L 配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。 37、0.1％标准丙氨酸溶液 组份浓度 0.1％

配制量 0.5L 配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。 38、0.1％标准谷氨酸溶液 组份浓度 0.1％

10L 配制量 0.5L 配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。 39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 组份浓度 0.1％

配制量 1L 配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。 40、酚溶液

配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 41、0.5％淀粉溶液 组份浓度 0.5％

配制量 0.1L 配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。 42、对羟基联苯试剂

配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中， 配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮 或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。 生物化学实验常用缓冲液的配制方法

1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0） 配制量 1L 配置方法 1. 称取磷酸氢二钠?12水 8.82 g。

2. 称取磷酸二氢钠?2水 27.34g。 3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。 2、洗脱液 组份浓度 0.15mol/L （含0.15mol/L氯 配制量 10L

化钠的0.005mol/L 配置方法 1.称取氯化钠87.66g。 pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的 磷酸缓冲液250mL溶解。

3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。 3、0.3mol/L磷酸缓冲液 组份浓度 0.3mol/L

（pH7.8） 配制量 0.5L

配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠?12水49.150g。 2.磷酸二氢钠?2水2.000g。 3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。 4、0.2mol/L乙酸缓冲液 组份浓度 0.2mol/L

（pH4.6） 配制量 2L 配置方法 1.准确称取乙酸钠?3水54.44g。 2. 加入23mL冰乙酸，溶解。

3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。 5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸 组份浓度 0.2mol/L

缓冲液 配制量 各1L （pH 2.6、4.6、6.6）

配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4?12水143.256g， 用去离子水定容至

2L。

2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸?1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。

3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： pH值 A（mL） B（mL） 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5 4. 按上表混匀后，4℃保存。 6、20×SSC 缓冲液 配制量 1L

（pH7.0） 配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。 2.准确称取88.2g柠檬酸钠?2水。 3.溶解于800mL去离子水中。 4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。 5.加去离子水定容至1L。 注意：按实验需要可分装后高压灭菌。 10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 7、0.15mol/L氯化钠- 组份浓度 0.15mol/L 乙二胺四乙酸二钠 配制量 1L

缓冲液 配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。

（pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。 3. 溶于800mL去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。 5.加去离子水定容至1L。 8、1/15mol/L的磷酸盐 组份浓度 0.15mol/L

缓冲液 配制量 1L （pH7.6） 配置方法

1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。

2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4? 2水11.876g（或磷酸氢二钠?12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。

9、5×Tris-GlycineBuffer 组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS （SDS-PAGE电泳缓冲液） 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tris 15.1g

Glycine 94g

SDS 5.0g

2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10、5×SDS-PAGE 组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8）

Loading Buffer％（W/V） 10 SDS

0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 配制量 5mL 配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1M 1.25mL

SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE阴离子交换纤维素 （1）纤维素的处理

取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。 （2）纤维素的重生

回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。 （3）纤维素的保存

回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。

2、SephadexG型葡聚糖凝胶 （1）凝胶的特性要点

葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表。

*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 **为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。 D＝Darcy’s law (2)凝胶的溶胀*

G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表 Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间

凝胶型号 G-10～G-200

20～22℃（室温）

所需最小溶胀时间*

100℃（沸水浴）

Tris-HCl

Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 G-100 G-150 G-200

3 3 3 3 24 72 72 72

1 1 1 1 3 5 5 5

*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速。 （3）凝胶的回收与保存

凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。

经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。 【注意】

a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。

b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。

c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。 d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。 微生物学实验常用培养基的配制 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 pH

水 121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉 硝酸钾 氯化钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 硫酸亚铁 琼脂

20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 20g

3g 5g 10g 15~20g 7.0~7.2 1000mL

水 pH

后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠 磷酸氢二钾 氯化钾 硫酸镁 硫酸亚铁 蔗糖 琼脂 水 pH

121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖 蛋白胨 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁

1/3000孟加拉红（rose

bengal，玫瑰红水溶液） 琼脂 pH 蒸馏水

112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯

蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 pH

1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制：

1000mL 7.2～7.4

配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化

2g 1g 0.5g 0.5g 0.01g 30g 15~20g 1000mL

自然

10g 5g 1g 0.5g 100mL 15—20g

自然 800mL

200g 20g 15—20g

自然

培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至

(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）

甘露醇（或葡萄糖） 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁 氯化钠 二水合硫酸钙 碳酸钙 蒸馏水 pH

113℃灭菌30min。 8、半固体肉膏蛋白胨培养基 肉膏蛋白胨液体培养基 琼脂 pH

121℃灭菌20min。 9、合成培养基 偏磷酸铵 氯化钾 七水合硫酸镁 豆芽汁 琼脂 蒸馏水 pH

加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。121℃灭菌20min。 10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基 黄豆芽

蔗糖（或葡萄糖） 水 pH

补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。121℃灭菌20min 。 11、油脂培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 香油或花生油 1.6%中性红水溶液 琼脂 蒸馏水 pH

121℃灭菌20min

注：(1)、不能使用变质油。 (2)、油和琼脂及水先加热。 (3)、调好pH值后，再加入中性红。

(4)、分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。

10g 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 1000mL 7.0—7.2

100mL 0.35—0.4g

7.6

1g 0.2g 0.2g 10mL 20g 1000mL

7.0

100g 50g 1000mL

自然

培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。用水

10g 5g 5g 10g 1mL 15—20g 1000mL

7.2

12、淀粉培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 可溶性淀粉 蒸馏水 琼脂

121℃灭菌20min 13、明胶培养基 牛肉膏蛋白胨液 明胶 pH

在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。溶化后调pH7.2—7.4。 121℃灭菌30min。 14、蛋白胨水培养基 蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 pH

121℃灭菌20min。 15、糖发酵培养基 蛋白胨水培养基 1.6%溴钾酚紫乙醇溶液 pH

另配制20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）各10mL。 培养基的配制：

(1)、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durham tube），使之充满培养液。

(2)、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121℃灭菌20min；糖溶液112℃灭菌30min。

(3)、灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液0.5 mL（按每10mL培养基中加入20%的糖液0.5mL，则成1%的浓度）。配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。 16、葡萄糖蛋白胨水培养基 蛋白胨 葡糖糖 磷酸氢二钾 蒸馏水

17、麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌） 葡萄糖 氯化钾 酵母浸膏 醋酸钠 琼脂

1g 1.8g 2.5g 8.2g 15—20g

5g 5g 2g 1000mL 1000mL 1—2mL

7.6 10g 5g 1000mL

7.6 100mL 12—18g

7.6 10g 5g 5g 2g 1000mL 15—20g

将上述各成分溶于1000mL水中，调pH7.0—7.2，过滤。分装试管，每管10mL，112℃灭菌30min。

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