岛津LC操作步骤

重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司 Chongqing Huading Modern Biological Pharmaceutical Co.,LTD

标准操作规程

岛津LC-10ATvp色谱工作站操作规程 登记号 编制者/日期 审核者/日期 批准者/日期 变更记录 修订号： 批准日期： 执行日期： HD-WS-03-590-00 共 8 页 生效日期 回顾日期 颁发部门 GMP认证小组 变更原因 Copy NO. 分发部门 财 务 部 [ ] 审 计 部 [ ] 行 政 部 [ ] 营 销 部 [ ] 物料管理部 [ ] 质量管理部 [√] 设备动力部 [ ] 生产技术部 [ ] 水针剂车间 [ ] 原料药车间 [ ] 固体制剂车间[ ] 重庆市华鼎现代生物制药有限责任公司 HD-WS-03-590-00 8-1

1 目的：制定岛津LC-10Atvp色谱工作站操作规程，确保操作人员正确使用色谱仪。

2 适用范围：适用于岛津LC-10Atvp色谱工作站操作。 3 责任者：岛津LC-10Atvp色谱工作站操作者。 4 正文：

4.1仪器组成及开机

4.1.1仪器组成 LC-10Atvp泵、SIL-10Advp自动进样器、SCL-10Avp系统控制器、CTO-10Avp柱箱控制箱、SPD-10AvpUV-VIS紫外-可见检测器、CLASS-VP （Ver.6.12）LC工作站、EPSON Stylus C41打印机，各仪器均有独立电源开关。

4.1.2 开机 依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器、打印机、系统控制器、工作站的电源开关。 4.2 工作站启动及仪器配置 4.2.1 工作站启动

电脑自检后，在Windows98开始菜单下，双击CLASS-VP窗口，显示Shimadzua CLASS-VP主菜单，双击Instrument 1,显示仪器注册对话框，输入用户名及密码，然后Login ,进入仪器模式窗口，将会有“滴”的一声，表示工作站已经通过系统控制器与各组成仪器连接。 4.2.2 仪器配置

4.2.2.1 选择File>Configure,显示Instrument Configuration (仪器配置)对话框，输入instrument name及instrument type,然后单击Configure ,显示一个Shimadzu HPLC system Configuration(系统配置)对话框。

4.2.2.2在Shimadzu HPLC system Configuration(系统配置)对话框中双击左框中要选择的仪器图标或单击该图标后，再单击顶端绿色箭头，将它移到右边的Configure modules(设置模式)框中。

4.2.2.3 对于每个设置的模式，双击响应图标并完成配置对话框。 4.2.2.4 单击OK，退出Instrument 1至Class-vp主菜单，再重新进入Instrument 1，使设定的仪器系统生效。

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4.3 仪器参数的设定和启动 4.3.1 泵和柱温箱的参数设置

4.3.1.1 选择Method>Instrument set up,显示仪器设置对话框。

4.3.1.2 单击对话框Pumps,在mode下拉菜单中选择流速方式，包括：Isocratic(等度)、Binary gradient (梯度洗脱)、Low Pressure Gradient(低压梯度)三种方式；此外需设置最大压力、最小压力、流速。设定完毕，单击Apply 确认。

4.3.1.3 单击对话框Time Program,设定时间程序。 4.3.1.4 单击对话框CTO-Avp柱温控制，设定柱温。 4.3.1.5 单击Apply，确认以上设定。退出。 4.3.2 检测器参数设定

4.3.2.1 选择Method>PDA set up ，显示其对话框。

4.3.2.2 单击对话框中的General标签，设置数据收集参数，包括波长范围，灯的类型，采样频率，周期，采样时间以及图谱存储方式。其中图谱存储方式有3D和 Multi Chromatogram两种方式，一般情况选择多波长方式，以便减少文件占有的存储空间。单击Apply确认。

4.3.2.3 单击Multi标签，设置检测波长。首先单击通道号右边的Active方框，（出现红色标记），然后为每个通道输入检测波长，宽度。利用此项可以根据需要进行单波长或多波长的测定。 4.3.2.4 单击Apply,确认以上设定，退出。

4.3.2.5 系统设定完毕后，为使系统按设定条件运行，单击control >download method装载设定的方法后再击活系统，此时，在提示是否保存当前方法的对话框中选择Yes。

4.3.2.6 方法设定完毕后，应在File-Method-SaveAs中存储方法。 4.3.3 启动各仪器

4.3.3.1 选择Control>Direct control,屏幕显示一排直接控制工具栏图标按钮。 4.3.3.2 按下工具栏图标中的控制器图标按钮、灯图标按钮，即可开启泵、检测器和柱温控制箱。

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注：开泵前需更换流动相：打开旁路阀，用针管抽出约20ml流动相，或者按下泵控制面板上的purge键，自动冲洗泵，冲洗完毕，关上旁路阀。（若使用自动进样器，每日工作前也应打开进样器内部右下角的帝路阀，用注射器抽出10ml清洗液，再旋紧旁路阀。） 4.4 采集数据

4.4.1 选择Control-Preview Run，观察基线，等待基线走稳。

4.4.2 基线走稳后，选择Control-Single Run显示Singli Run Acquisition对话框，在对话框中设置Date path,Date file,Vial,Injection volumn,然后单Start,开始自动单一进样。

4.4.3 选择View>Gallery观察即时色谱图，视图的显示方式有：三维图、混合视图、混合视图W/3D、等高线图、三维和等高线图、光谱图、多色谱图示、比例图。

4.4.4 使用Control菜单中的Extend Run或Stop Run来调整采样时间，使各组分峰采集完整。

4.4.5 根据完整采样所需的时间，打开Method>PDA Set Up,修改run time. 4.5 积分参数的设定

4.5.1 在色谱图上单击鼠标左键，激活屏幕下方的积分参数工具栏图标按钮。

4.5.1.1 按下要设定的积分参数图标按钮，然后按照状态栏的提示进行对话框的操作，设定积分参数并自动添加入Integration Events tablets。积分参数使用的对话框基本形式（图3）

Start/Stop time 与予设值有同时，输入积分参数的的开始和结束时间 Value 与予设值不同时，输入积分参数的值。

Insert into integration Events table 选择此项可向积分参数表中添加参数。 单击 Add to Table ，将积分参数添加入积分参数表中。

4.5.1.2 积分参数包括Width(宽度)、Slope（斜率）、Drift(漂移)、T.DBL（极限）、Lock On/Off (积分关闭)、Tailling On/Off（拖尾峰切除）、Horizontal Baseline(水平基线)、Leading peak reject on/off(前沿峰切除)、Minimum

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Area(最小峰面积)、Negative Peak reject On/Off（负峰切除）、Negative Peak invert On/Off(负峰转换)等。

注意：在添加积分参数的时候，要保持窗口的检测波长选择通道处于正在使用的检测波长，否则积分参数的添加无法在积分参数表中看到。 4.5.2 打开Method>Intergration Events 菜单查看积分参数表。

4.5.3 选择Anlysis-Analyze 用所设定的积分参数对该色变图进行分析，根据要求适当调整积分参数，直至分析结果达到要求。 4.6 peak/Group Tables (峰表)的设定

4.6.1 在色谱图上单击鼠标左键，激活积分事件工具栏图标按钮，近下工具栏中的Define Peak 图标按钮，然后按状态栏的提示进行对话框的操作，将需要测不定期的峰的保留时间及保留时间窗口自动添加至峰表中。 4.6.2 选择Method-Peak/Group Table图标按打开峰表。

4.6.3 在峰表中输入要校准的信息，其中ID、Ret、Window已经自动添加，其他需输入的内容包括： Name Units

峰代表的各组分名称 内标法内标峰的ID号 报告结果的浓度单位 选择使用的检测通道

选择标准曲线的类型，包括point to point(点到 点)、quadratic（二次的）、cubic（三次的）、Average RF（平均RF）几种方式

Zero

选择此框后，强制校准曲线通过零点 选择Weight Average

输入每份取样的各组分以及内标物质的量

Calib Flag Level 1-10 4.6.4 退出 4.7 编制模式

4.7.1 选择Methld>Coustom Report打开编制报告窗口。 ISTD ID#

Analysis Channel Fit Type

如果需要添加或修改其他信息或参考说明书。

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4.7.2 选择File>Report Templet >Open打开Class vp目录，其中列有多种标准报告模式，包括Esternal Standard.Srp(外标法)、Internal Standard.Srp(外标法)、Normalization.Srp(峰面积归一化法)等，选择需要的模式，单击Open,即显示所选Method custom report的空白格式。 4.7.2.1 色谱图报告的设置

4.7.2.1.1 在空白格式图的位置双击鼠标左键，打开Data graph properties(图形性质)对话框，按下trace set up (曲线设置)标签设定以下几项： show和lgnd 单击复选框以确认图例的显示 Data source 单击兰色按钮输入“current data” Trace 在下拉菜单中选择当前所用的检测通道

Scale to 利用下拉菜单，选择一个缩放的选项，包括atuoscale to

largest Peak、Atuoscale to 2nd3rd largest[Peak、User Defined、Normalized

Ymin.Ymax 在User defined情况下手动输入

Annotation 单击兰色按钮，打开Trace Annotation properties复选

框，在左框Availatble Annotations下双击想显示的条款或单击此条款后再单击顶端的绿色箭头，将其移到Show the following annotations框下。

4.7.2.1.2 完成标签对话后，单击OK，则把所选的曲线加入到报告中当前的曲线窗口。

4.7.2.2 表格的报告设置

4.7.2.2.1 将光标移到空白格式的表格位置，然后在表格上单击鼠标右键，显示弹出菜单。

4.7.2.2.2 单击Report Properties显示Run Report对话框添加此对话框。

（1） Data Source 编组框

选择Current Data或单击文件图标显示Open Data文件对话框，选

择一个数据文件。

（2） Report 编组框

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Name Peaks 选择All或Detected only Unnamed Peaks 报告未命名的峰 Groups 报告组峰

Totals 报告全部的数字栏的数据统计 （3） Available Parameters 编组框

双击需要报告的参数或单击后按绿色箭头将参数移到“Report The following Parameters”表中。 4.7.2.2.3 单击OK，退出

4.7.2.2.4 选择弹出菜单“Show Data At Design Time”察看报告数据。 4.8 选择File>Method>Save。整个方法设定完毕并保存。

注：为了使每次测定所用的方法互不影响并完整保存，可以在仪器开启后选择File>Method>New创建一个新的方法，此方法会暂时以untitled.met的名称储存，待各方法参数设定完毕后，再选择File>Method>Save as输入一个方法名，Save,然后再打开此方法，即可使用。 4.9 样品组的测定

4.9.1 选择File>Sequence>New,显示New Sequence对话框（图5），编缉此对话框。

（1） Run Information 编缉框

Sample ID 输入数字或文本格式的识别标记。 Method 打开需要的方法。

Data path 输入数据存放路径，一般选择Class vp/Data来存储所有数据。 Data file 输入文件名。

例如10个以内的样品，输入形式是***（01），则这个顺序的文件名依次自动生成为***（02）***（03）等。超过10个样品，命名方式是***（001）。

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（2） Amount Values 编辑框 可以全部输入1

（3） Auto Sampler 编辑框 输入起始，结束瓶号，进样体积（ul），重复

进样针数

4.9.2 单击OK退出此对话框，并进入顺序表格，表格中已经自动添加入样品ID号、数据文件名、方法名、瓶号、进样体积和进样次数。 4.9.2.1 其他需要添加的项目：

（1） Run Tape 单击兰色按钮，打开Sample Run Types对话框，把标准品首次运行的Run Type选择设定为Begin Calibration和Clear All Calibration,末次运行类型选择设定为End Calibration, 中间的则自动变为Calibration;供试品的运行类型选择为Unknown。

（2） Level 标准品的Level值与峰表中的Level值相对应添加入1~10；供试品的Level值全部为0。

（3） Sample Amount 标准品的重量输入1，供试品的重量输入相应的具体数值。

（4） ISTD Amount 标准品的内标物量输入1，供试品的内标物输入与前面的峰表中相同的数值。 4.9.2.2 编辑完成，退出。

4.9.3 选择Control-Sequence Run此时系统会提示是否保存此顺序操作，选择Yes设定顺序操作名称，Save。进入顺序对话框：

（1）Sequence Information编组框 输入使用的顺序操作的名称。 （2）Run Range 编组框 选择要运行的范围。 （3）Mode 编组框 可使用默认的类型

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添加完毕，单击Start，开始运行此顺序进样，并在色谱窗口显示即时图谱，每一针采样完毕进行即时图谱处理。 4.10 实验报告的查看及打印

4.10.1 选择File>Sequence>print打印Sequence报告。

4.10.2 选择Method-Calibrate report 可以察看校准报告，并在校准报告的校准曲线一单击右键，利用弹出菜单打印此报告。

4.10.3 选择Report >view(print)>method custum Report并配合数据文件的调用，可以查看单个数据文件的报告并打印。

4.10.4 在工作中，运行顺序操作前，为防止不必要的结果打印，应选择Method>Preperties中的Options，使Print Report After Acquister命令处于关闭状态，待顺序操作运行完毕，再击活此命令，然后选择Sequence>Prosess进行顺序后处理并同时打印报告。 4.11 关机

4.11.1 整个测定工作完毕，在Direct Control图标按钮工具栏中将柱温箱和检测灯关闭。 4.11.2 冲洗色谱柱。

4.11.3 在Direct Control工具栏中关闭Instrument On/Off按钮，然后退出Instrument1仪器模式窗口，将会有“滴”的一声，表示工作站已经与仪器断开。打开Shimdazu CLASS-VP主菜单，退出。工作站返回到Windows98开始菜单下，退出。

4.11.4 依次关闭系统控制器、电脑、泵、自动进样器、柱温箱、打印机。

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