岛津LC-20AD型高效液相色谱仪操作规程

岛津LC-20AD型高效液相色谱仪操作规程

1、 检查流动相是否足够、在有效期内。使用前须进行超声脱气5～10分钟。脱气后将吸滤

头由保护液中换至流动相瓶内。更换柱温箱内所需的色谱柱，拧紧两端的螺帽，在泵运行过程中检查色谱柱是否有漏液现象。 2、 依次开启电脑、柱温箱（40℃）、输液泵电源，紫外检测器在平衡系统大约30min后开

启，这样做是为了延长检测器的氘灯寿命。

3、 在首先进行的系统平衡时，起始运行时的流速应从低到高进行调节，主要是为保护色谱

柱考虑。（一般起始流速设定为0.5ml/min即可，待基线平稳后调整到检测所要求的流速，目前我们所测样品的要求流速均为1.0ml/min）。 4、 在输液泵操作面板上按“func”键，输入流速值“0.5”，按“enter”键。设定好流速后

按“Pump”键，启动输液泵。如系统中有气泡存在应进行排气（泵压过低或不稳定）。按“Pump”键停泵，将排气阀旋转90°至水平位置，按面板上的“purge”键，一般2～3分钟即可排除气泡。按“purge”键停止，将排气阀旋回“close”，按“Pump”键，重新启动输液泵。

5、 打开电脑桌面上“N2000在线工作站”，选择“通道2”。点击“方法”，选择“校正曲

线”，单击右上方所需的峰名，界面上出现校正曲线图形，说明此方法被采用。

6、 泵运行大约30min左右，启动紫外检测器的电源。等检测器自检通过后就可进行系统

参数的设定并平衡系统。（当检测器显示屏显示波长值时，如“λ 318nm”时，表示自检通过，检测器正常）。 7、 点击在线工作站的“数据”、“开始基线”，查看基线的平衡情况。

8、 基线平衡过程中，可查看电压值，按检测器操作面板上的“zero”键或点击工作站界面

上的“零点校正”，修正检测电压值接近于零。（进样以后禁止此操作）。基线稳定后，将流速设定为检测值，更改参数过程中无需停泵。（检测流速为1.0ml/min）。

9、 在系统平衡过程中，可进行进样针的清洗、样品的称量、稀释溶解和过滤等准备工作。

（液相用水应为新鲜纯净水，所有溶液必须经过0.45um微孔过滤膜过滤后使用）。 10、等基线稳定了，样品溶液过滤后，用进样针置换清洗多次，擦净进样针外表上的残留溶

液，就可进样了 。（进样针内不允许有气泡）

11、确保进样针内的进样量至少是进样器定量环的3～5倍（60～100ul即可）。 12、在手动进样器的“inject”位置将进样针水平的插到底，扳动手柄至“load”，较迅速的

推动进样针注入样品溶液，然后将手柄扳回到“inject”位置，水平抽出进样针，此时色谱工作站开始自动的采集数据。

13、样品检测过程中可点击工作站上方的“预览”或“报告编辑”按钮，查看样品色谱峰的

相关信息。在“实验信息”一栏中输入所测样品的名称和实验者。点击“时间范围”或“电压范围”，可任意设定所需的时长和电压值，调节工作界面的大小，便于更完整的查看整个峰形。

14、检测完成后，点击“停止采集”按钮，选定样品需要被保存的文件夹路径，在出现的对

话框中，输入所测样品的批号或其他信息，点击“保存”，色谱图就会被保存在指定路径。（所有检测的图谱均被保存在D盘的相应文件夹中）。在“N2000离线工作站”里，可对色谱图进行查看并进行所需的修改。

15、标准曲线的绘制：在标准溶液各点浓度进样完毕后需要进行标准曲线的绘制。（在D盘

中预先新建相关的文件夹，以便保存对应的谱图。） ①点击停止“查看基线”。

②依次点击“方法”、“组分表”、“谱图”，打开刚才进样的标准点的谱图保存文件夹，单击

谱图1，“确定”，点击“全选”，在“峰名”栏里输入所要检测物质的名称，如“proxel”或“苯甲酸钠”“山梨酸钾”，点击“采用”、“OK”。 ③点击“校正”、“组分含量”，输入组分浓度值，单击“确定”，点击“加入标样”，单击谱

图1，单击“确定”。

④重复输入“组分含量”后的步骤，依次输入标准溶液各点的浓度值，点击“加入标样”时

也对应的选择相同序号的谱图。如：第1点浓度值对应的谱图为1，以此类推。 ⑤各浓度值全部添加完毕后，点击“校正完毕”。 ⑥点击“校正曲线”，单击界面右上方的色谱峰名称，画面出现所进标准溶液的校正曲线，

此时可以查看曲线的精确度，以R值接近于1.0000为准。

⑦校正曲线建立后应再进行Level control的进样，以检查校正曲线是否可以被采用。Level

control根据各检测方法的要求配制。（Level control＜±10%） 16、标准曲线完成后就可以进行所需检测样品的进样分析了。

17、所有检测结束后需对系统和色谱柱进行清洗。应最先关闭检测器电源，然后让系统继续

运行流动相10分钟后，按“pump”键停泵，将吸滤头换至保护液中、流速设为0.5ml/min，按“pump”键重新启动泵，系统开始清洗，时间约为30min。注意泵压的变化，如果压力波动，应停泵进行排气后再清洗。 18、点击在线工作站的“停止基线”，关闭色谱工作站。如跳出“通道2方法已改变，是否

保存”对话框，点击“否”。

19、在清洗时，用清洗针筒吸取一定量的纯甲醇，插入进样器后扳至“load”位置，缓慢平

推进样针，对定量环进行冲洗。清洗结束后扳回手柄至“inject”位置，拔出清洗针。用保护液清洗系统30分钟左右后，可换用纯甲醇继续冲洗至基线平衡（大约30min左右），停泵。用纯净水和纯甲醇依次重复清洗进样针。

20、系统清洗结束后，依次关闭输液泵、柱温箱和电脑电源并为进样口插入保护针头和保护

帽。处理废液瓶中废液。

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