vc测定

实验一、维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

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一、实验原理

2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。

2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。

还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。

当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 反应式如下：

二、实验仪器与试剂

1.仪器 (1)公用仪器 ① 组织捣碎机；水果刀；② 托盘天平；精密天平；称量纸；③ 1000ml烧杯；250ml烧杯；500 ml、1000 ml量筒；④ 20cm镊子；⑤ 蒸馏水，蒸馏水洗瓶；⑥ 记号笔、标签纸、定性滤纸。

(2)分组及仪器： 每组仪器：

① 100ml具塞量筒；100mL棕色容量瓶，250mL棕色容量瓶；② 10ml量筒；③ 5ml、10ml移液管； ④ (微量)酸式滴定管； ⑤ 50ml、500ml烧杯；⑥ 50ml或100ml三角烧瓶；⑦ 漏斗；漏斗架； ⑧ 台式离心机；⑨ 电炉；⑩ 吸耳球；玻璃棒。

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2.原料及试剂

原料：橙子。

(1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。 (2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液400ml，稀释至800ml。 (3)抗坏血酸标准溶液：

精确称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，最好临用前配制，冰箱中保存。1mL含0.2mg抗坏血酸。 (4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：

称取碳酸氢钠52mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚50mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。于冰箱中保存。。

临用前按下法标定：

取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：

每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。

式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)； V1----抗坏血酸的量(ml)； V2----消耗染料溶液的量(ml)。

三、实验步骤

1. 取300~500g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重，精确至0.01g。 2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆2~5min。 3. 取出匀浆物质。

4.称取10-30g匀浆物质(使其含有VC1-5mg) 于50ml小烧杯中，精确度1%，编号，记录。 (第一组取10g，第二组取20g，第三、四组取30g)。

5. 用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。

6. 加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。 7. 取上述溶液过滤或离心。

8. 用移液管吸取5-10ml滤液置于三角烧瓶内，加入5-10ml 1%草酸（2个平行样品）；用移液管吸取5-10ml蒸馏水，加入10ml 1%草酸（2个空白对照）。(第1-3组取10ml，第4组取5ml) 9. 2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色），记录染料消耗量。若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。 10. 计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下：

维生素C含量（ml/100g）=[(V1-V2)×T/W]×100

式中：V1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml)； V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml)； T ---- 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数；W ----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g)。

四、实验报告

《食物成分表》（全国平均值）中橙子的VC含量约33mg/100g。与测定值比较。

五、注意事项

(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇消泡。

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(2)大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2％草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。 (3) 样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。

(4) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。 (5) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。

2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用。

(6) 干扰滴定因素有：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶，直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。

(7) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。

(8）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染料为宜，可根据标定结果调

整染料溶液浓度。

六、实验结果、数据计算与分析

每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。 =0.2×2/26.3=0.015

式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)； V1----抗坏血酸的量(ml)； V2----消耗染料溶液的量(ml)。 维生素C含量（ml/100g）=[(V1-V2)×T/W]×100

=（32.6-0.1）×0.015/1.50]×100 =32.5

式中：V1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml)； V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml)； T ---- 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数；W ----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g)。

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