细菌的分离纯化和接种实验

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

实验题目 细菌的分离纯化和接种实验 实验类别 综合

实验原理问答题：

1. 为什么湖水用10_4、10_5

低的浓度? 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开, /细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。

2. 为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养

:第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水 分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。

3. 微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面?

答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射 接种，活体接种等。

⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理， 接种过程必须在煤气灯旁进行，接种 环、玻

璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置， 操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触， 往培养基是划线或 点菌时动作要轻以防把培养基划破等。

四、实验步骤

1. 制备细菌稀释液：

使用5ml 移液管加4.5ml 无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6

标签的小试管中， 用一根Iml 的无菌移液管吸取10-2的湖水稀释液0.5ml 放入贴有10-3标签的小试 管中，1ml 的无菌移液管吸洗三次以混匀。 然后用另外一支Iml 的无菌移液管从 贴有10-3标签的小试管中、10 6稀释液进行平板稀释分离而不用更高或者更

使其成单个个体 >√Z Ξ?λf ICad

吸取10-3的湖水稀释液0.5ml放入贴10-4标签的小试管中，吸洗三次以混匀。同法依次连续稀释至10-5、10-6稀释液。

六、思考题

1.氧化亚铁硫杆菌（ ThiObaCilIuSferrOOXidans,T.f ）为生物冶金重要菌种，属微 生物中原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属。广 泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉和沉积硫内，尤以金属硫化矿和煤矿

等酸性矿坑水（pH<4）中最为常见。其化能自养，专性好氧，嗜酸，革兰氏阴

思考其分离纯化的方法和步骤。

虫化亚铁硫和:芮

(Tr fenooxidajLi S)

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30 ~35

无或有鞭? t F ?Λ , O. 5 ?I- Omn 亚饮离子+还丿凉嶄物

兼性灰叙

答：采取酸性矿坑水或实验室浸矿培养液作为菌液，在实验室用

9K 或Leathen 培养基反复分离纯化。

具体方法一：取菌液10mL ,加入盛有100mL 灭菌9K 或Leathen 液体培养 基的

250mL 锥形瓶中，在30C ,120r∕mi n 的空气浴恒温摇床中培养，直至锥形瓶

中的溶液变为红棕色，一般需4天。反复几次。然后采用固体培养基稀释涂布平 板法分离纯化菌种以获得纯培养。在 9K 固体培养基上7?10天出现圆形凸起状

小菌落（d ≈ 1mm ），将单独小菌落挑起，每个小菌落分别接种到装有 5mL 液体

培养基的小试管中，以棉球封口，培养条件同上，直到小试管的液体颜色也变成 红棕色。重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离，最后分离出优良菌 株。

具体方法二：取菌液ImL ,用pH=2.5的稀硫酸按每次稀释10倍，依次稀 释成10-1

, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6浓度的稀释液。吸取稀释度为10-4, 10-5, 10-6稀释样各0.2mL ,分别接种到三个事先准备好的灭菌 9K 琼脂固体培养基， 涂布均匀，正置于30C 恒温培养箱中静置培养，次日倒置继续培养，直至固体 培养基表面出现圆形凸起状小菌落（d ≈ 1mm ）, 一般需两周。将单独小菌落挑起， 每个小菌落分别接种到装有5mL9K 液性，，主要利用利用CO 2为碳源, 并吸收氮、磷等无机营养来合成自身细胞。请

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