纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
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纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
第7期(总第178期)
农产品加工 学刊
No.72009年7月
AcademicPeriodicalofFarmProductsProcessing
Jul.
文章编号:1671—9646(2009)07-0010--03
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
再吐尼古丽 库尔班t,’叶
凯1,涂振东1,冯国郡1,傅
力2
(1.新疆农业科学院。新疆乌鲁木齐830091;2.新疆农业大学食品学院,新疆乌鲁木齐830052)
摘要:采用同态发酵法,进行了生产燃料乙醇的试验,同时尽量在相同条件下,研究了纤维素酶对甜高粱秸秆发酵
产酒率的影响。实验分2组。第1组为空白试验:酵母菌接种量为0.2%,发酵温度28℃。第2组为对照试验:酵
母菌接种量为0.2%,发酵温度28℃,纤维素酶0.8%,发酵时间为114
h。结果表明,第1组折算。甜高粱茎秆发酵
产酒,体积分数为6l%的乙醇得率为3.5倒,100g;第2组折算,体积分数为61%的乙醇得率为6.56g,100g,比不加
纤维素酶的乙醇得率提高了3.06%。
关键词:甜高粱秸秆;固态发酵;纤维素酶中图分类号:TQ920.6
文献标志码:A
doi:10 39691jissn 1671—9646(X) 2009 07 003
InvestigationtheInfluenceofCellulase
on
EthanolProduction
fromSweetSorghumStalks
KurbanZaytungull,"IreKail,TaZhendongI,FengGnoj聃1,FuLi2
(1.XinjiangAcademy
of
A鲥culturalSciences,V,1Jmql,Xinjiang
830091,China;
2.CollegeofFood
Science。Xinjiang
Agricultural
University,Ummqi,Xinjiang830052,China)
Abstract:Thispaper
wag
producedfuelethanolbysolid-statefermentationand
at
the
SalTle
time
investigated
theinfluenceof
cellulase
on
ethanolproductionfrom
sweet
sorghumstalksinsame
eandition.Thisexperiment
was
disportin
totwo
groups,the
firstgroupwasblank0.2%inoculation,0.1%Glueoamylase,fermentationtemperature28oC,fermentationtime114h,the
secondgroupwas
0.8%cellulase.The
resultsshowedthattheethanolyield
offirstgroupwac33.5g/100gswe赡tsorghumstalks
andtheethanolyieldofsecondgroup
Wag6.56∥100g,whichWagenhancedby3.06%thanfirstgroup.
1【eywords:flwc弛tsorghutrlstalks;solid
fermentation;cellulage
甜高梁又称糖高粱、芦粟或甜秆,既是一种粮食及酶制剂生产方面具有广泛的应用[41。
hm2甜高梁能
目前国内外对甜高粱固态发酵生产燃料乙醇的研产6×104—7.5
X
104
kg富含糖分和纤维的茎秆,
究仍较少13I。本文在对甜高粱茎秆粉碎后进行固态发3000~7500
kg的粮食籽粒1“,其中70%~80%的干质
酵的同时,探索了纤维素酶对甜高粱茎秆同态发酵的量组分均可被利用于生产燃料乙醇121。随着国家对粮作用。充分利用甜高粱茎秆中的可溶性糖和部分纤维素发酵来牛产燃料乙醇,提高了甜高粱茎秆的乙醇得率,为甜高粱茎秆的乙醇同态发酵的工业化生产提供
目前,对甜高粱茎秆液态发酵乙醇工艺已有广泛理论依据。
1材料与方法
state
1.1试验材料
甜高粱秸秆,品种为新高粱4号(xT_q),新疆农业科学院玛纳斯试验站提供,于2008年5月种
植,9月18号收割,生长期为128d,平均糖锤度为
17.6%。
耐高温酿酒酵母(菌种AL41为活化酿酒酵母),
收稿日期:2009-03一18
基金项目:农业部农村能源综合建设项目(200732);中国石化科技项目(207036)。
作者简介:再吐尼古丽 库尔班(1981-),女.新疆人,硕士.研究方向:牛物化工。E-mail:zaytungqd@sohu.嗍。
为通讯作者:叶凯(1962一),男.浙江人,研究员,研究方向:农业科研、管理与生物质能源。
万方数据
作物、糖料作物,又是能源作物。每1食燃料乙醇的限制,发展甜高粱燃料乙醇是生产清洁
生物能源的重要途径嘲。
研究,但存在着废液治理难、环境污染严重等问题;而固态发酵具有能耗小,产物浓度高,产生废水少,运作费用低等优点。同态发酵(solidfermentation,SSF)是指在没有或几乎没有自由水存在下,在有一定湿度的水不溶性基质中,用一种或多种微生物发酵的牛物反应过程。由于固态发酵具有能
耗少、产品分离成本低、废液少、不存在二次污染等突出优点,使得它在农副产品的综合利用、生物农药
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
2009年第7期
再吐尼古丽 库尔班,等:纤维素酶对甜高粱秸秆发酵产酒率影响的研究
11
由新疆农业大学食品科学院提供。l-2仪器与试剂
1.2.1仪器
摇匀,在波长540nm处测定吸光度值。以1.OmL蒸
SFSP320型狮牌多功能铡草粉碎多用机;LDz)(—40CI型立式灭菌器,上海精密科技有限公司提供;DHG'-'9240(A)型电热鼓风干燥箱,上海一恒仪器公司提供;TU一18lo型紫外可见分光光度计,
馏水代替葡萄糖标准液,按同样显色方法操作,作为空白调零点。以葡萄糖质量浓度(mg/mL)为纵坐标,吸光度值为横坐标,绘制标准曲线。得到的直线
方程为:
北京普析通用仪器有限公司提供;8卜l型台式低速
1.5
式中:卜溶液中还原糖质量浓度,mg/mL;卜溶液的吸光度;
Y=2.0198X一0.0167,R2=0.9996.
离心机,江苏产品;JY2002型电子天平,上海精科
产品;水浴锅、电炉、试管鼢15rain,长180mm)、
mL容量瓶、烧杯、移液枪、
蒸馏装置、升降台、铁架台、温度计、定性滤纸、擦
mT.离心管、l
000
尺——相关系数(平放)。葡萄糖标准曲线见图1。
奄
薹
魁嵌栅瞧
净纸、纱布、发酵罐。1.2.2试剂
(1)DNS试剂:称取6.5
g
DNS(3,5一二硝基
000mL
mL,
水杨酸)溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入l
爨
隧鼎
容量瓶中,加入浓度2mol/L氢氧化钠溶液325
1000mL。
再加入45g丙三醇,摇匀,冷却后加蒸馏水定容至
吸光厦A
(2)葡萄糖标准溶液:准确称取干燥至恒质量的葡萄糖202mg,加入少量的蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100mL,使葡萄糖质量浓度为2.02mg/mL。
图1葡萄糖标准曲线
2.2乙醇标准曲线的绘制
取2支刻度一致的10mL的比色管,其中1支
(3)乙醇标准溶液:称取优级纯无水乙醇
0.2100
g,溶于100mL容量瓶中,加水至刻度。
g
(4)质量分数为5%的重铬酸钾溶液:称取5
100
加适量的乙醇标准溶液,分别加入重铬酸钾溶液2.0mL,加水至刻度。在100℃下水浴10min,流水冷却5rain,以零管作参比,用1cm比色皿在600nm
波长处测定吸光度值,以乙醇质量浓度(mg/mL)为
重铬酸钾(AR)溶于50mL水中,放冷,定溶于
mL容量瓶中。固态发酵
纵坐标,吸光度值为横坐标,绘制标准曲线。结果的
直线方程为:
1.3试验方法
1.3.1
将甜高粱秸秆去叶,粉碎至2—3em备用。取l妇切碎原料,分别装人20个500mL三角瓶中,在压力0.1MPa下灭菌30min,冷却后分成2组。第1组为空白试验,加入活化好的酵母,菌种接种量为
0.2%;第2组为对照试验,酵母菌接种量为0.2%,
式中:y_溶液中乙醇质量浓度,mg/mL;
Y=23.394X一0.0105.R2=0.9994.
卜溶液的吸光度;
尺——相关系数(平放)。
乙醇标准曲线见图2。
纤维素酶为0.8%,拌匀,用纱布包扎好后,置于
28℃恒温箱中发酵114h。1.3.2还原糖含量的测定
龟篁
魁爱删蜓镳
心
取一定量的发酵原料,加入其2倍质量的蒸馏
水,浸泡1h,过滤、离心发酵液,采用DNS法【5l测
定其还原糖含量。
1.3.3乙醇含量的测定
采用重铬酸钾氧化法16li贝|I定试样乙醇含量。2结果与分析
图2乙醇标准曲线
2.1葡萄糖标准曲线的绘制
取6支试管,加入葡萄糖标准液、蒸馏水和
DNS试剂2.0mL,于沸水浴锅中加热2min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加人蒸馏水9.0
mL,2.3还原糖含量的分析
本实验在尽量相同的条件下分2组进行发酵,第1组为空白试验,第2组为对照试验。
发酵过程还原糖的含量见表1。
万方数据
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
gan/tit'食%m,1
农产品加1= 学刊
2009年第7期
表1发酵过程还原糖的含量
发酵时间冀芸耋簇嚣试验的煮嘉薹誓簇塞景蓉嚣
J,/K
mL-
/nag mL-1,%
表1显示发酵过程中2组试验的还原糖浓度变化发酵过程中的糖含量变化曲线见图3。
龟矍
魁烂
咖f
瞧磐隧硝
发酵时间肌
◆一对照试验的还原糖质量浓度.me_/mL;★一空白试验的还原糖质鼙浓度,mgC,nL
图3发酵过程中的糖含量变化曲线
图3为发酵过程中还原糖质量浓度的变化曲线。h开始h开始平缓地降低。从图中可以看出,h时,对照试验的还原糖含
发酵过程中,定期取秸秆样均为20g。将20
g
h,挤出发酵液,测量酒精含量。
发酵过程的酒精含量见表2,发酵过程中的酒精由图4可以看出,发酵甜高粱秸秆制取酒精的整
14h。对于同一糖度水平的高梁秸秆
万方数据
发掣间粼空瓣的徽絮喾
表2发酵过程的酒精含■
…1,I雌 mL-l
,%
/rag Hd『‘
,%
龟●
鲎
髓矮咖瞧
蜒
卯钙∞弱∞巧加:2
爬
m,o
0
20
40
60
80
100
120
发酵时间册
◆一空白试验的酒精质量浓度.mgmL;★一对照试验的酒精质量浓度,mg/m1.
图4发酵过程中的酒精含量的变化曲线
h时的酒精质量浓度都达到最高值,以后基质中酒精浓度都开始降低。凶为纤维素酶能加快秸秆糖
h时,对照试验的酒精浓度比空白试验高得多。
适时检测小瓶中还原糖的浓度,当残糖的浓度不
h时,开始蒸馏,通过比较两组试验
的酒精得率可以看出,第1组(空白试验)折算,体
g/100
g甜高粱秸秆;
g/loo
g甜高粱秸,比不加纤维素酶发酵
(1)以高粱秸秆为原料,进行简易的固态发酵试
cm,
MPa下灭菌30rain,冷却后分2组进行发114
h时开始蒸酒。结果表明,空白试验体积分数为
g/100
g甜高粱秸秆,对照试验
(下转第15页)
数据。发酵过程中要定期测定发酵液中的还原糖质量
浓度。
而言,相对于不加纤维素酶,在同一个发酵时间内,
运用纤维素酶可以提高酒精质量浓度。两组试验在发酵66化水解度,因此发酵66图3结果表示,两组的还原糖含量都是从42降低,而48在同一个发酵时间,对照试验还原糖的消耗速度比空
白试验快。比如发酵48再变化时,测定蒸馏大瓶发酵液的蒸馏馏分中的酒精
浓度。发酵114积分数为61%的乙醇得率为3.5得率为6.56
量为0.69%,而空白试验还原糖含量为1.45%。秸秆
的主要成分是纤维素、半纤维素和木质素,而后者作
第2组(对照试验)折算,体积分数为61%的乙醇
为秸秆细胞壁的主要成分较难被一般微牛物分解,从而限制了这些成分的降解和利用171。纤维素酶的添加可提高纤维素、半纤维素等多糖的消化率嘲,因此对照试验的还原糖消化率比空白试验高。2.4酒精含量的分析
的乙醇得率提高了3.06%。
3结论
验。工艺条件为:将甜高粱秸秆去叶,粉碎成2~3
秸秆用水浸泡1含量的变化曲线见图4。
在压力0.1酵,定期检测发酵醅中的还原糖含量和酒精含鼍,
61%的乙醇得率为3.5
个发酵时间为1
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
2009年第7期赵玉,等:超声波协同复合酶法提取南瓜多糖最佳条件的研究
表2
提取方法超声波协同酶法
300
素进行U33)正交试验。
超声波协同酶法提取南瓜多糖的正交试验结果见表l。
.
3种提取南瓜多糖方法的结果比较
最佳工艺条件
在酶解的基础上,进行超声波处理,超声时问为10min,超声功率
W,料液比l:30
超声时M15min,超声功率为W.料液比1:20
纤维素酶l%,果胶酶1.5%,加人10mLpll值为5.5的磷酸氧二
16.73
多糖提取率
,%25.94
表1超声波协同酶法提取南瓜多糖的正交试验结果
超声波法
600
复合酶法
20.54
钠一柠檬酸缓冲溶液,在40℃的水
浴振荡器I|l提取30
rain
溶l叶J多糖被溶出的目的,所以超声波协同酶法的提取率要高于其他2种方法。
3结论
(1)超声波协同酶法提取南瓜多糖的最佳条件为:在酶解的摹础卜进行超声波处理,超声时间为
10
min,超声功率300W,料液比l:30。
(2)超声波协同酶法、超声波法、复合酶法3种
从表l结果得出,影响多糖提取率的3个因素的大小顺序分别为B>A>C,由试验结果确定的主要影
响参数为A2B:c3,即超声波协同酶法提取南瓜多糖的最佳条件为:在l%纤维素酶,1.5%果胶酶酶解后,选择超声时间为10rain,超声功率300W,料液比
方法提取南瓜多糖,其中超声波协同酶法的提取率较
高,是较佳工艺。参考文献:
【l】【2】【3】
1:30(g:mL)。在此最佳条件下,得到的多糖提取
率为25.94%。
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2.3不同提取方法的比较
3种提取南瓜多糖方法的结果比较见表2。
由表2可知,超声波协同酶法得到的南瓜多糖提
罗锋,汪河滨,杨玲,等.超声一微波协同萃取法提取
甘草黄酮的研究阴.食晶研究与开发,2006,27(8):
127-128.
取率为25.94%,比超声波法的提取率高9.21%,比复合酶的多糖提取率高5.40%。通过试验表明,单一法不能达到多糖的完全提取,其提取率均低于超声波
协同酶法,协同作用在于复合酶酶解后增加超声波处理,超声波可以进一步破碎细胞壁,达到酶解作用未
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"-.4-—+斗-—卜—H卜-+ +—+-—卜——¨-+ "4--+-+-+ —卜斗-+-+ —●一——卜_—+—+—+-+-+-+-+"--4-"-+--+-+ —●一-+ + —卜-—卜--●一 + ‘卜-。‘卜
(上接第12页)
体积分数为61%的乙醇得率为6.56g/100g甜高梁秸,比不加纤维素酶的乙醇得率提高了3.0H6%。因
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此,纤维素酶的添加可以加快发酵速率,提高发酵
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万方数据
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究
作者:作者单位:
再吐尼古丽·库尔班, 叶凯, 涂振东, 冯国郡, 傅力, Kurban Zaytungul, Ye Kai, Tu Zhendong, Feng Guojun, Fu Li
再吐尼古丽·库尔班,叶凯,涂振东,冯国郡,Kurban Zaytungul,Ye Kai,Tu Zhendong,FengGuojun(新疆农业科学院,新疆,乌鲁木齐,830091), 傅力,Fu Li(新疆农业大学,食品学院,新疆,乌鲁木齐,830052)
农产品加工·学刊
ACADEMIC PERIODICAL OF FARM PRODUCTS PROCESSING2009,""(7)0次
刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:
参考文献(8条)
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10.学位论文 代树华 甜高粱茎秆固态发酵酒精及饲料的研究 2009
甜高粱(Sorghum bicolor(L.)Moench)茎秆富含可溶性糖份,是生产燃料乙醇和饲料的理想作物,本文研究了甜高粱茎秆的贮藏,固态气提发酵乙醇的工艺条件,并进行了生产工程实验,最后研究了甜高粱茎秆固态发酵生产蛋白饲料,为甜高粱茎秆工业化生产奠定了基础。
首先,探索了甜高粱茎秆的自然贮藏条件。通过对北京和内蒙古两地不同气候条件下自然干燥贮藏的甜高粱茎秆物性变化及含糖量变化差异进行监测和研究,分析环境温度和湿度对甜高粱茎秆自然贮藏的影响,确定了在内蒙古低于10℃、干燥的气候条件下,自然贮藏的甜高粱茎秆能够满足固态发酵生产乙醇和饲料全年生产的要求,总糖为58%(g/g干基)的甜高粱茎秆在内蒙古自然贮藏8个月后损失仅11.7%。
其次,研究了甜高梁茎秆固态气提发酵生产乙醇。确定了将切碎至2cm左右的甜高粱茎秆揉碎至0.15cm厚的颗粒物料对发酵和气提具有较好的效果,发酵时间为28h,10h后开始气提,在35℃下气提效率为77.5%,随着温度的升高,气提效率不断增加,在75℃时,气提效率达到96.4%。
然后,研究了甜高粱茎秆连续固态发酵耦合热泵气提分离生产工程实验。通过热泵与发酵分离的耦合,实现了节能降耗,提高了气提效率和对发酵塔内的温度控制。批次发酵(22kg甜高粱干基)获得乙醇溶液总计:30.13 L,最高浓度为25%,平均浓度10.8‰即为:2.88L纯乙醇,气提发酵周期为40h,乙醇产率为19.89%,气提效率提高至85.1%,照这样计算,生产1t酒精需要5.2t的甜高粱秸秆干料。
最后,研究了甜高粱茎秆二次固态发酵生产蛋白饲料。进行一系列的单因素试验,确定了甜高粱秆固态发酵蛋白饲料的最佳条件为:以假丝酵母进行第一次发酵,添加1.5%(g/g干基)硫酸铵,接种率为5%(V/V),含水量为65%,自然pH值,32℃好氧发酵22h,然后接入鼠李糖乳杆菌进行第二次发酵,接种率为10%(V/V),含水量为70%,pH6.0,40℃厌氧发酵58h,获得了含有高营养价值的乳酸菌蛋白饲料,粗蛋白含量达到36%。
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