AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程 - 图文

批准人： 颁发部门 制订人： 质保部 执行日期 复核人： 制订日期： 复核日期： 批准日期： 编号 版本 发送部门 莄1.0 SOP04006 聿制作份数 蚅_____份 羄 莅修订记录 修订人 修订原因 罿修订内容 版 修订日期 本 1. 2. 螂目的：

羂确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

3. 4. 腿范围：

螆适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。

5. 6. 蒃定义：

螁无

7. 8. 腿职责：

膆荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。

羁质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。

9. 10. 蕿内容：

艿5.1 室内温度控制在15～30℃，相对湿度45～75%。

芃5.2 仪器操作

蚃5.2.1 依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。

莈5.2.2 接着打开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。

荿5.2.3 点击7500 Software v2.3图标，打开软件。

蚄5.2.4 按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块，检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。（检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平，检测96孔PCR反应板无需配平）

膁5.2.5 再次按压托盘使其滑入仪器。

莁5.2.6 新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5 cycles；（95°，10″；62°，35″）×40 cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），20μl反应体系。

葿5.2.6.1 在Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中，将Target Name下的Target1改成FAM；

点击Add New Target，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。

肅5.2.6.2在Setup-Run Method-Graphical View中的Reaction Volume Per Well后面输入20（20μl反应

体系）。选中第一个Holding Stage，点击Delete Selected删除；在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击Add Stage下拉菜单选择Cycling，在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下面点击图标收集荧光。

袃3 点击Save下拉菜单下的Save As Tamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。

膀5.2.7 已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击打开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5 cycles；（95°，10″；62°，35″）×40 cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），Reaction Volume Per Well:20μl（20μl反应体系）。

薈5.2.8 在Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample 1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。

蒆5.2.9 在Run-Amplification Plot中点击START RUN，命名为（当日日期+当日上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号为），保存在默认文件夹中，开始运行。

芁结果分析

衿PCR反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。

蚈也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以（用户可根据实际情况自行调整，Start值可

以在3～15、End值可设在5～20），Threshold值（Rn）推荐设定为5000～15000，点击Analyze进行分析，然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。

蚃实验结束后取出反应管（切勿打开管盖），顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。

羃5.3 仪器维护

蚈5.3.1 每周维护

蚈检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。

肄 ? 至少每周检查一次计算机磁盘空间。

蒁 ? 如果硬盘的可用空间不足其总容量的20%，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。

蚁 关闭控制7500 Instrument的计算机，30秒后再次开启计算机。

螈 用无绒布块（不脱毛）蘸取75%酒精清洁7500 Instrument的表面。（注：切勿使用有机溶剂清洁7500

Instrument。）

蒅使用75%酒精浸泡反应管托架（晾干后放回仪器内）。

膂5.3.2 每月维护

蒀执行背景校准。（可执行一次背景校准以检查是否存在污染物）

袈 运行磁盘清理和磁盘碎片整理。

袅 ? 至少每月一次。

蚀 ? 当Windows?操作系统显示消息提示执行碎片整理时。

芈 ? 切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500 Real-Time PCR Software。

羈5.3.3 每半年（6个月）维护

芆1 检查灯具状态。

莂①在7500 Software中，选择Instrument→Lamp Status/Replacement以确定卤素灯的状态。

芁显示Lamp Status/Replacement对话框：

肈? Condition –表示以下其中一种状况：

莃– Good –灯具工作良好，不需要更换。单击Close。

肄– Failed –必须更换灯具。单击Close，然后按照步骤更换卤素灯。

肀– Change Soon –灯具使用超过2000小时；生产商建议将其更换。单击Close，然后

决定是否更换灯具。如果决定更换，请按照步骤更换卤素灯。

膇? Usage (Hours) –灯具已照明的总小时数。

螄? Lamp Current –灯具的输出电流，以安培为单位(A)。低电流意味着灯具可能将要失效。

薂? Date Last Replaced –上次更换灯具的日期。

蝿②在执行一次运行之前或期间，7500 Software可能显示以下警告：

芇 膅消息 描述 芄Warning – Cannot detect sufficientcurrent 薈在运行开始时，灯具电流低于可接受水平。from lamp. Either lamp is notinstalled properly 在按照步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运or needs to bereplaced. 芇行。 Warning – Cannot detect sufficientcurrent 薆7500 Software停止了该次运行，因为在运from lamp. Either lamp is notinstalled properly 行中灯具电流下降到可接受水平之下。在按照or needs to bereplaced. 步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。在消息框中单击OK，检查仪器日志，然后更换灯具。 蚂 Warning - The lamp usage hasexceeded 2000 薁在运行开始时，灯具使用时间超过2000小hr. We recommendreplacing the lamp soon to 时。单击Cancel Run，然后更换灯具，或者ensure optimal assay performance. 单击Continue Run。重新运行ROI、背景、光学和染料校准。

莇执行目标区（ROI）校正。

蚃执行背景校准。

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