液相色谱_串联三重四极杆质谱测定饮料中双酚A残留

2009年12月第30卷第12期

食品研究与开发韵、酒香韵和焦甜香韵等清新飘逸的菠萝风味。

3结论

采用同时蒸馏萃取法，提取菠萝果实中的香气成

分，经气相色谱-质谱联用仪对菠萝挥发性香味化合物进行分离和鉴定。确认了其中的44种成分，占总质量分数的90.06%，并用面积归一化法测定了各种成分的质量分数，其主要成分为：6-十八烯酸（21．49％），十六酸（16．99％），3－甲硫基丙酸甲酯（5．75％），硬脂酸乙酯（5．44％），硬脂酸（5．00％），辛酸甲酯（3．72％），己酸甲酯（3．19％），5－乙酰基－己酸乙酯（1．53％），糠醛（1．5％）等。该研究通过对其化学成分与感官指标之间的相关分析研究，掌握了菠萝的基本香气和香韵组成，这为菠萝的深加工和产品开发提供参考。参考文献:

[1]周浓.菠萝醋酸发酵饮料的研制[J].食品研究与开发，2006,27(8):

97-99[2]林奇,樊爱萍,白洁.菠萝果酒的研制[J].食品工业科技,2004,25(5):

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[3]邹玉红,韩秋霞,顾景梅，等.菠萝果肉酸奶的研制[J].食品研究

与开发,2007,28(9):94-96

[4]潘咏梅,薛毅,张金泽，

等.菠萝汁及其在加工过程中挥发性风味成分的变化[J].食品与发酵工业,2007,33(5):109-113

[5]徐丹,车振,胡瑞军.低糖菠萝柠檬复合果酱的研制[J].食品工业，

2006（3）:57-58[6]

张爱玉,蔡长河,李万颖,等.菠萝果脯、果酱的加工工艺[J].福建果树,2002(1):24-25[7]

常虹,李远志,龚丽,等.微波真空干燥菠萝粉初步研究[J].食品与机械,2008,24(3):112-115[8]

Van Den Dool H,Kratz P D.A generalization of the retention index system including linear temperature programmed gas -liquid partition chromatography [J].J Chromatogr,1963,11(2):463

收稿日期：2009-02-15

液相色谱-串联三重四极杆质谱测定

饮料中双酚A 残留

杨红梅，王浩*，刘艳琴，郭启雷，史海良，阎龙宝，李小运（国家食品质量安全监督检验中心，北京100094）

摘

要:建立饮料中双酚A 残留的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法。方法为：用乙腈处理样品,以

ZORBAX XDB -C 18柱（2.1mm ×150mm,5μm ）分离，流动相为乙腈和水溶液（梯度洗脱），电喷雾负离子MRM 模式检测。该方法的检出限5.0μg/L ，方法定量下限10.0μg/L ，线性范围5.0μg/L ～100.0μg/L ，加标回收率96.2％～102.5％，相对标准偏差为2.30％。

关键词:液质联用仪；双酚A ；饮料；残留

DETERMINATION OF BISPHCNOL A RESIDUES IN BEVERAGE BY LC-MS-MS

YANG Hong-mei,WANG Hao *,LIU Yan-qin,GUO Qi-lei,SHI Hai-liang,YAN Long-bao,LI Xiao-yun

（Nation Food Quality ＆Safety Supervision and Inspection Center ，Beijing 100094，China ）

Abstract :This thesis developed a LC -MS -MS method for bisphcnol A residues in beverage.The mass spectrometer was operated in the negative ion mode using multiple reaction monitoring.In the method.A sample was extracted with acetonitrile,Chromatographic separation was carried out on a ZORBAX XDB C 18column （2．1mm ×150mm,5μm),the mobile phase is acetonitrile-water solution with gradient elution.The limit of detection is 5.0μg/L and the limit of quantitation is 10.0μg/L,The linear plots were obtained between 5.0μg/L-作者简介:杨红梅（1966—），女（汉），高级工程师，本科，从事食品安全与营养检验的研究工作。*通讯作者：王浩（1969—），男（汉），工程师，硕士研究生，从事食品安全与营养检验的研究工作。

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检测分析

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2009年12月

第30卷第12期食品研究与开发表1分离双酚A的较佳洗脱梯度

Table1Optimal elution condition for determination of bisphcnol A

时间/min Time/min

5

10

A水溶液/%

Water solution/%

90

B乙腈/%

Acetonitrile/%

10

100

100

表2双酚A的质谱参数

Table2Parameter of mass spectra of bisphcnol A

被测物质名称

Name of sample

双酚A

Bisphcnol A

定量离子

Quantitative

iocn

227/212.1

定性离子

Qualitative

iocns

227/212.1；227/132.9

碎裂电压/V

Fragment/V

120

碰撞能量/V

Collision

Engergy/V

17；30

近几年来,随着国内生活水平的不断提高,人们越来越重视自身的健康问题,对食品的安全也越来越关注。双酚A化学名为2，2－二（4－羟苯基）丙烷，分子式为C15H16O2，分子量为228.29（U），易溶于碱性水溶液、醇类和丙酮中。它常用来作为单体合成聚碳酸酯塑料，这种材料可以用来加工成奶瓶、饮水瓶等食品接触制品。材料中残留的双酚A会迁移到接触的食品中，从而污染食品。由于缺乏一个适宜的快速准确检测方法,给监督执法带来一定的困难。因此,建立灵敏、准确、快速的饮料中双酚A残留检测方法,为执法提供技术鉴定依据,是当务之急。

目前测定双酚A的方法主要有气相色谱法、气-质联用法、高效液相色谱法和液-质联用法等[1-4]。现有的方法因处理方法过于繁琐,不适于快速检测。针对这些情况，我们建立了饮料中双酚A残留的快速测定液相色谱-串联质谱法，以达到简便快速,灵敏性高的目的。

1材料与方法

1.1仪器、试剂和材料

1.1.1仪器

液相色谱-串联质谱仪，Agilent6410型串联三重四极杆质谱，配Agilent1200型液相色谱仪：Agilent公司，美国；Milli-Q去离子水发生器：Milli-Q公司，美国。

1.1.2试剂和材料

乙腈（色谱纯）；甲酸（色谱纯）；双酚A购自sigma 公司，纯度为98%～99%。

1.1.3样品

果汁饮料、含乳饮料等均购自本地家乐福超市。

1.2分析条件

1.2.1色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱：5μm，2.1mm×150mm；流速：0.25mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；流动相：流动相A为水溶液，流动相B为乙腈；洗脱梯度程序如表1。1.2.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应检测；干燥气：N2；雾化气压力：275.8kPa；干燥气温度：340℃；干燥气流速：8L/min。双酚A质谱分析的条件参数如表2所示。

1.3样品处理

1.3.1果汁饮料等不含蛋白饮料

准确吸取样品5mL至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，超声提取15min。用快速定性滤纸自然过滤。滤液过0.2μm滤膜，进液相色谱-串联质谱仪分析。

1.3.2含乳饮料等含蛋白饮料

准确吸取样品4mL至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，超声提取15min。用快速定性滤纸自然过滤。滤液过0.2μm滤膜，进液相色谱-串联质谱仪分析。

2结果与讨论

2.1样品提取

含乳饮料等样品中成分复杂，蛋白质含量较高，而双酚A又易溶于乙腈，因此本方法通过乙腈除去样品中的蛋白质，过滤后直接测定。试验结果表明，该处理使样品中的双酚A有较高的稳定性和满意的提取效率。

2.2质谱条件的优化

采用直接进样方式分别将浓度为100μg/L的双酚A注入离子源中，在正离子检测方式下进行母离子全扫描，得到双酚A的分子离子峰。以该离子峰为母离子，进行二级质谱扫描，最后采集全扫描的二级质谱图，得到碎片离子信息，然后再对得到的二级质谱参数如破碎电压、碰撞能量等进行优化，使定性离子与定量离子产生的离子对强度比例达到最大时为最佳，得到双酚A的最佳质谱参数。

2.3色谱条件的优化

因为双酚A属于中等极性化合物，因此本方法采

100μg/L.Overall recoveries were between96.2％-102.5％,and RSD value was2.30％. Key words:LC/MS/MS；bisphcnol A；beverage；residues 检测分析

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2009年12月第30卷第12期

食品研究与开发图1双酚A 标准品的提取离子质谱图

Fig.1Total ion spectrum of bisphcnol A

用梯度洗脱的方法提高分离效果，测试开始时，流动相中乙腈和水溶液的比例为10∶90，然后在0min~5min 内将二者的比例调整为100∶0，这一部分主要是洗脱样品中极性较强的杂质，

5min~10min 内将保持二者的比例为100∶0，

这一部分主要是洗脱样品中目标化合物，并使目标化合物峰形良好。通过上述两步梯度，在10min 内，可以较好的分离样品中双酚A 。图1分别为浓度为10μg/L 双酚A 标准物质的抽取子离子质谱图。

表3双酚A 在不同饮料样品中回收率

Table 3Recovery of bisphcnol A in spiled sample 样品编号Numble of sample 果汁饮料1果汁饮料2果汁饮料3果汁饮料4含乳饮料1含乳饮料2含乳饮料3含乳饮料4

添加浓度/(ng/g)Spiked levels/(ng/g)

20.020.020.020.025.025.025.025.0

加标回收率/%Recovery/%102.598.796.997.495.499.697.596.2

Count/(%)vs.Acquisition Time/(min)

从图1中可以看出双酚A 得到较好的分离。2.4线性范围与检出限

将逐级稀释的标准工作液分别进样20μL ，测定结果经线性回归，线性范围：5μg/L~100μg/L ；回归方程（y 为峰面积，

x 为浓度，μg/L ）：y=800.01x +4308.87，线性相关系数：0.9989；进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结果计算,测得方法检出限为5μg/L,按测定方法计算,本方法最低检出量为10.0μg/L 。2.5

方法的回收率和精密度

吸取果汁饮料及含乳饮料空白样品各4份,每份分别为5mL 和4mL ,分别添加浓度为1.0mg/L 的双酚A 标准溶液0.1mL,按供试品溶液制备方法制备后,进行测定,结果见表3。

从表3中的回收率及精密度数据可以看出，平均

加标回收率在96.2％～102.5％之间，相对标准偏差在2.30％（n=8）。同时将浓度为0.1mg/L 的标准样品重复测定6次并取平均值计算精密度,测得变异系数2.02%（n=6），满足试验要求。3结论

目前，饮料中双酚A 残留量还没有国标检验方法。本法样品前处理简单、试样用乙腈稀释，C 18反相色谱柱双样品中双酚A 残留量进行有效分离，电喷雾离子化，串联质谱检测。试验表明：本法测定低限10.0μg/L ，加标回收率高于96%，达到了国内先进水平，可以为国内质检部门快速测定饮料中双酚A 残留量提供方法参考。参考文献：

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收稿日期：2009-07-15

检测分析

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