一些仪器操作规程

一些仪器操作规程1

一些仪器操作规程

岛津LC-10ATVP高效液相色谱系统操作规程 ............................................................................ 1 岛津LC-10ATVP液相色谱操作规程 ............................................................................................ 2 岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的操作规程.............................................................................. 3 Agilent 1260 HPLC .......................................................................................................................... 7 Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤 .................................................................................. 9 Waters高效液相色谱仪操作规程 ................................................................................................. 12 1100高压液相色谱仪操作规程 .................................................................................................... 14

岛津LC-10ATVP高效液相色谱系统操作规程

一、仪器组成及开机

1. 仪器组成：岛津LC-10ATVP泵， SPD-10AVP检测器，电脑一台（装有N2000色谱工作站）。

2. 开机：插入电源，依次打开泵，柱温箱，检测器，电脑（并进入色谱工作站）。 二、LC-10ATVP泵参数设定

1. 开始运行前务必确保储液瓶中装有流动箱。并且吸滤器已经放入储液瓶中，排液管的另一端已经放入废液瓶中。

2. 待仪器自检完毕后，将排液阀逆时针旋转180°，然后按[Purge]键，进入吸入过滤器至泵的冲洗操作，冲洗完毕后，关闭排液阀。（注意：如果排液阀旋转大于180°，空气将进入排液管，最终导致空气进入流动相）

3. 按[func]键，设定所需流速（例如：设定1ml/min，按[1]键然后按[enter]键确定，再按[CE]键恢复初始状态）。

4. 按[pump]键，启动泵，对色谱柱进行平衡，待压力显示稳定，可开始测试操作。 三、SPD-10AVP检测器参数设定 按[func]键，设定所需波长，（例如：设定254nm，按[2][5][4]数字键，然后按[Enter]键确定）再按[CE]键恢复初始状态。 四、测定操作

1、色谱工作站操作，双击桌面快捷方式（在线色谱工作站）并在（采样控制）项下选择保存路径，采样结束时间等，在【仪器条件】项下输入仪器条件等。 2、进样操作：

控检测器[zero]键置零，进样阀手柄置入LOAD位置，将分析样注入进样阀的定量环中。 （1）将进样阀手柄转到INJECT位置，进样。

（2）测定：进样后，即可在数据采集观察记录的色谱图。打印图谱和结果，双击桌面快捷方式[离线色谱工作站]即可在主页面设置项中选择打印图谱和结果。 五、关机操作

1. 全部测定完毕后，按规定用适当溶剂（一般用甲醇）冲洗泵，进样器、柱及检测器。

一些仪器操作规程1

2. 关电，登记。

岛津LC-10ATVP液相色谱操作规程

1．目的

规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 2．范围

适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 3．职责

质检员对本规程的实施负责。 4．规程

4.1系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。 4.2准备

4.2.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 4.2.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 4.2.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。 4.2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 4.4参数设定 4.4.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。

4.4.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4.4.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4.4.4梯度设定

4.4.4.1在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键；

4.4.4.2用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键； 4.4.4.3重复上一步设定其它时间步骤；

4.4.4.4用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。

4.5更换流动相并排气泡

4.5.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 4.5.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

4.5.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.5.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

4.5.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

4.5.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为

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5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 4.6平衡系统

4.6.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。 4.6.2等度洗脱方式

4.6.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

4.6.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

4.6.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。

4.6.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 4.6.3梯度洗脱方式

4.6.3.1以检验方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。

4.6.3.2在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。 4.7进样

4.7.进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。

4.7.2用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的操作规程

一、系统组成

本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。 二、准备

1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）

4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A 泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 四、参数设定

1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。

2 、流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

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3 、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4、梯度设定：

4.1 在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键； 4.2 用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键； 4.3 重复上一步设定其它时间步骤；

4.4 用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。

五、更换流动相并排气泡

1.将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 2.逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；

3.按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

4.将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

5.如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

6.如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 六、平衡系统 1、查看基线：

1.1 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件， 1.2 输入实验信息并设定各项方法参数后， 1.3 按下“数据收集”页的 [ ] 按钮。 2 、等度洗脱方式

2.1 按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。

2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。

2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 3 、梯度洗脱方式

3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按2项下方法平衡系统。

3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。 七、进样

1 、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。

2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。 3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。 八、谱图的判断及结果计算 1、内标法 用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子（f）：

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其中 As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。 2、外标法：

①用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值（r）：r=mr/Ar（其中 mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。 ）

②再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的含量（mi）：mi=r×Ai（其中 Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高）。

③必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量，或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量。 九、清洗管路及进样口

1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（4.1.1~4.1.2）操作，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。

2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。

3 、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。 【特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池，在分析完毕后，均应按（5.1）充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇-水，充分冲洗 Lc-15C高效液相色谱仪操作 1.工作原理

高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由积分仪记录，得到的信号-时间曲线。 2.系统适用性

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,包括以下要求： 色谱柱的理论板数（N）：理论板数应高于各品种项下规定的最小理论板数，若理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数,应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。

分离度和拖尾因子：除另有规定外,分离度应大于1.5T应在0.95～1.05之间。 3.仪器组成

本系统由LC-15ATvp溶剂输送泵、手动进样阀7725i、SPD-15Avp紫外 检测器、Lcsolution工作站、电脑和柱温箱等组成。. 4.准备

4.1根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（箭头依次朝上）。 4.2检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，用吸气减压装置脱气。 4.4按标准操作规程配制样品和对照溶液，用合适的0.45m滤膜过滤。 5.开机

接通电源，依次开启泵，检测器（在进样前30min打开）、Lcsolution工作站。 5.1 LC-15C泵操作

5.1.1逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；

5.1.2按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min(可设定)的流速冲洗，5min（可

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设定）后自动停止；

5.1.3将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

5.2 SPD-15A检测器参数设定 5.2.1检测器显示屏显示

λ（NM） abs (AV) range (AUFS) 1amp 254 0.000 0.001 D “λ （NM）”项为波长，“abs (AV) ”项为吸光度，“range (AUFS) ”项表示量程，“1amp”项表示氘灯。

5.2.2泵显示屏显示如下： FLOW/PRESS PRESSURE P.MAX P.MIN 0.000 0 0 0 “FLOW/PRESS”项为流速，“PRESSURE ”项表示压力，“P.MAX”项为最大压力，“P.MIN ”项表示最小保护压力，。

5.2.3按[pump] 启动泵，待压力稳定后，可开始分析测定工作。

5.2.4观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.1.1操作。

5.2.5观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 5.3启动【LC实时分析】

5.3.1打开电脑主机电源，确保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。

5.3.2打开每一个单元的电源，并确保所有单元都没有显示任何错误信息。双击Lcsolution15C色谱在线色谱工作站，启动Lcsolution色谱在线色谱工作站单击仪器的分析，显示【LC实时分析】窗口。

5.3.3检查分析仪器，单击助手栏中的（系统检查）图标，设置要检查的项、设置输出格式，设置每一项并单击运行，请确保没有任何仪器故障，并在【LC实时分析】窗口的状态栏显示区域中显示为就绪。 5.4 建立新方法文件

5.4.1点击LC实时分析左上角助手栏文件项，选择文件项里的新建方法文件，在【仪器参数视图】中设置在分析中要使用的仪器参数，【仪器参数视图】分为[正常]和[高级].单击[正常]显示一个标签,可以在其中输入分析条件,比如测量时间,泵流速,检测器波长,洗脱模式等,确保为每一个检测器设置[LC停止时间]和[结束时间]并应用到所有采集时间.

5.4.2泵的洗脱分为等浓度和二元高压梯度洗脱,如方法使用到二元高压梯度洗脱,则点击[LC时间程序]在LC时间程序里设定对应的梯度和时间.

5.4.3在【仪器参数视图】中设置好所有仪器参数后, 单击[下载]将设置传输到仪器,并且仪器将按照新的参数开始运行;点击LC实时分析左上角助手栏文件项,选择文件项的另存方法,将方法保存在易于找到的文件夹中。 5.5执行单次分析

5.5.1进入【LC实时分析】窗口后，确保显示[就绪]，且[色谱图视图]中的基线稳定后，单击[LC实时分析]窗口助手栏上的单次运行图标，出现【单次运行】屏幕，设置指定用于分析的方法文件，输入创建数据文件的名称，输入完毕后点击确定。然后将进样阀手柄置“LOAD”处，进样，将进样阀手柄转到“INJECT”位置，工作站自动采集数据，状态栏显示{正在运行}。

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5.6数据分析

5.6.1双击Lcsolution在线色谱工作站，启动再解析，在助手栏中选择[LC数据分析],在助手栏中选择相对应的文件序号进行数据处理分析。 6.关机

选关闭泵然后选主窗口右上角关闭框退出色谱工作站。用鼠标单击开始选关闭系统，选择关闭计算机，单击是。关闭检测器电源，用纯甲醇充分清洗泵和色谱柱，待压力降到正常水平关闭泵电源。 7.维护保养

7.1紫外检测器应在进样前30min打开，样品分析完毕立即关闭。

7.2 检测时方法用到高度梯度洗脱时，要先单次运行一次。待基线平稳后方可进样，流动相用到缓冲盐时，要先用10%的甲醇水冲洗1h，才可换上缓冲盐。 7.3样品分析完毕，系统需用0.45μm滤膜过滤的纯甲醇冲洗1-1.5h，并用注射器吸取纯甲醇冲洗进样器，流动相中含有盐，要用10%甲醇水过渡冲洗1h，再用纯甲醇冲洗系统。 7.4若发现空载系统压力升高，可先下列步骤进行排除：

7.4.1将保护柱拆下，观察柱压是否正常，如果保护柱过滤芯片堵塞则予以更换。

7.4.2如更换保护柱过滤芯后仍不正常，再将色谱柱拆下，观察不连接色谱柱时压力。如仍然压力很高，说明柱子没有问题。

7.4.3 然后依次从色谱柱往进流动相的方向查找问题，拆掉单向阀上面的螺丝，观察压力变化，如果仍然有压力，则说明单向阀可能有问题。将单向阀拆下，观察压力变化，如压力正常，则将单向阀用甲醇超声清洗30min，然后安装再观察压力变化。

7.4.4 如问题仍然存在，可以考虑用5%稀硝酸水和纯异丙醇清洗系统或者更换单向阀，中间一定要用超纯水过渡，再用纯甲醇清洗，接上色谱柱用甲醇再次清洗系统。注：（5%稀硝酸水溶液超声时不要超过5min，因硝酸有腐蚀金属作用）

7.5 检测完样品间隔3小时之内可不用关闭检测器，若超过3小时可先关闭检测器，以减少氘灯能量的损耗。

7.6液相色谱仪四周应干燥清洁，切忌流动相或化学试剂溅到仪器上，产生腐蚀。 7.7每年校正一次，若产生异常情况或换氘灯，则必须再校正。 8.每次使用必须按要求填好仪器使用记录及维护保养记录。

Agilent 1260 HPLC

1 开机1.1 打开电脑。

1.2 打开液相色谱各个模块的电源。 1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。 1.4 排气：

1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。 1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。

1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。 1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，

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设流速：1.0ml/min。

1.4.6 同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。 2 编辑方法

2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。 2.2 选中除“数据分析 ”外的三项，进入下一选项卡。

2.3 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!）。进入下一选项卡。2.4 泵参数设定：在“流速”处输入流量, 如1.0ml/min，停止时间：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。进入下一选项卡。

2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。

2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。进入下一选项卡。

2.7 UV检测器参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。

2.8 在“ 运行时选项表 ”中，选中“ 数据采集”，点击“确定”。 2.9 从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。 3 单次采集

3.1 从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择 “前缀/计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。

3.2 基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。 4 多次数据采集

4.1 按照步骤2 编辑完整方法。 4.2 点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法”

4.3 点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择 “前缀/计数器”保存。 4.4 从“序列”菜单，选中“序列另存为…”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。 4.5 从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。 5 数据分析（脱机状态使用）

5.1 双击“仪器 —脱机”图标 进入的脱机画面。

5.2 从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。 5.3 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“ 确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。） 5.4 做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定”。 6 积分:

6.1 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击 ，自动加载积分参数。

6.2 点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。 6.3 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 7 标准曲线

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7.1 点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。 7.2 点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。

7.3 至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。 8 打印报告

8.1 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“ 确定”。 8.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告” 底部的“打印”钮。 8.3 点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法） 9 关机

9.1 关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）

9.2 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。 9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。 10 其它注意事项

10.1 当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。

10.2 系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。 10.3 注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。

Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤

(一)、开机：

1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。 2、打开 1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 5、把流动相放入溶剂瓶中。 6、打开Purge阀。

7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。 8 、设Flow：5ml/min，单击OK。

9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关

一些仪器操作规程1

泵， 关闭Purge valve。

11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。

12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。 （二）数据采集方法编辑： 1、开始编辑完整方法：

●从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。 2、方法信息：

●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 ●单击Ok 进入下一画面。 3、泵参数设定：（以二元泵为例）

●在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 ● 单击Ok进入下一画面。 4、自动进样器参数设定:

●选择合适的进样方式, 进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

●点击Ok进入下一画面。 5、柱温箱参数设定:

●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>” 键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。 ●点击ok进入下一画面。 6、VWD检测器参数设定:

●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在”Peak width (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min (2s)。●在Timetable 中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。点击ok进入下一画面。 7、DAD检测器参数设定:

●检测波长: 254nm,BW=30nm, 参比波长=350nm,BW=100nm;

●检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW： 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在*近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width（Response time）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。 ●点击Ok进入下一画面。 8、RID检测器参数设定: ●色谱条件:

进样体积: 20ul 。 光学单元温度: Off 。 极性: 正 。 峰宽(响应时间) : 4s 。

●“Optical Unit Temperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”---在不进行分析时可以让流

一些仪器操作规程1

动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。

●点击RID图标，选择RID Control ：Heater 设为On，若要循环流动相，必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池，将其设为On，并输入Purge 时间。 9、FLD检测器参数设定: 色谱条件：

● 样品：P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。 ● 进样体积：5ul。

● 柱温箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 ● 响应时间=4s. 停止时间： 出峰完毕。

● Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。 ● Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。

● PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。 ● “Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。 ● Multi Ex ： 多波长及光谱（激发）。 ● Multi Em：多波长及光谱（发射）。

● 同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

10、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。

11、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。

12、从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)。

13、从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。 14、从Instrument 菜单选择System on。

15、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。 （三）、数据分析方法编辑:

1、从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。

2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。 3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok,或选择”Use Ranges” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。 4、积分:

(1)、从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 (2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项， 则数据被积分。 (3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 (4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。 5、打印报告:

(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。

(2)、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。 (3)、单击Ok.

(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。

一些仪器操作规程1

(四)、关机:

● 关机前，用 100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗] ● 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关）。 ● 关掉Agilent 1100电源开关。

Waters高效液相色谱仪操作规程

1． 准备

1．1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

1．2 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 2．开机和泵操作 2．1开机

2．1．1接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。 2．1．2打开Millennium32软件，按「Login...」，按「OK」注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。

2．2更换溶剂

2．2．1打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；

2．2．2将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；

2．2．.3按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；

2．2．4 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%； 2．2．5将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；

2．2．6 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；

2．2．7 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止； 2．2．8 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。 2．2．9重复2．2．4~2．2．8直至所有即将使用的溶剂更换完毕。 2．3 排气泡

2．3．1 打开参照阀，换流动相为100%超纯水，设流速为10ml/min（注意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱）；

2．3．2 转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；

2．3．3 顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入泵中）；

2．3．4按［Stop flow］屏幕键停泵，关上参照阀。

2．3．5如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为10ml/min，冲洗2~5min（或更长时间）后停泵，重新接上柱。 3．平衡系统（分两种情况进行）

一些仪器操作规程1

3．1 等度模式

3．1．1 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。 3．1．2 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。

3．1．3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5~10%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。

3．1．4 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少5~6倍柱体积的流动相通过系统。

3．1．5 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按「Monitor」（此后泵由软件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移<10-3Au/min，噪声为10-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 3．1．6 按「Abort」图标（左上第五个），停止监视基线。 3．2 梯度模式

3．2．1 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。 3．2．2在进样前运行1~2次空白梯度。 4．进样

4．1 在QuickSet窗口内左下部选〈Single〉标签，在Sample Name档内填写试样名称；在Function档内选择试样类型（标准选“Inject Standards”；样品选“Inject Samples”）；在Method Set档内选择所需的方法组；在Injection Volume档内输入进样体积；在Run Time档内输入记录时间。

4．2 用针头滤器过滤试样溶液（注射液可不必过滤），用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

4．2．1 如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进样量应不大于定量环体积的50%，并要求每次进样体积准确、相同；

4．2．2 如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍（5~10倍准确性更佳）。

4．3 按〈Single〉标签内右边的进样(Inject)按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后，方可进样。

4．4 将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并记录图谱。

4．5 让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前1~2min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。

4．6 先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。 5．数据处理（外标法）和打印

5．1 右击系统主界面下的『Browse Project』图标，选择相应的项目，按「OK」进入Project窗口，选〈Channels〉标签。

5．2 建立处理方法 选择一个待积分的标准，右击后选“Review”进入Review窗口。按「Processing Method Wizard」图标（左边第一个）进入New Processing Method向导窗口，按「OK」。

5．2．1 划入一个感兴趣的最窄的峰，按「Next>」； 5．2．2 划入一段包含噪声的基线，按「Next>」； 5．2．3 划入一段要积分的区间，按「Next>」；

5．2．4 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按「Next>」、「Next>」； 5．2．5 在Name档内输入各组分峰的名称，按「Next>」、「Next>」；

一些仪器操作规程1

5．2．6 在Method Name档内填写方法名称，按「Finish」。退出Review窗口。 5．3 修改标准 选中所有标准，右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。 5．3．1 在Sample Type档内将Unknown改成Standard；

5．3．2 按「Amount」图标（左上第六个）进入Component Editor窗口； 5．3．3 按「Copy from Process Method」图标（左上第五个），选择刚建立的处理方法，按「Open」，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；

5．3．4 按「Save」图标存盘，退出Alter Sample窗口。

5．4 积分 先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入Background Processing & Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按「OK」。

5．5打印 在Project窗口下选〈Results〉标签。

5．5．1 选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按「OK」进入Report Publisher (Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标（左上第二个）即可打印结果。

5．5．2 按「Close」可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按「Print」图标（右数第二个）即可打印结果。 5．6 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系统，关闭Millennium32软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。 6．清洗系统和关机

6．1 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。 6．2 清洗进样阀

6．2．1 用启动注射器吸10ml超纯水；

6．2．3 将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上；

6．2．3 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。 6．3清洗柱

6．3．1 C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。 6．3．2 Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。 6．4 用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。 6．5清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。 6．6 填写使用记录。

1100高压液相色谱仪操作规程

一、准备工作： 1、 开启计算机系统电源进入Windows NT，根据提示按Ctrl+Alt+Delete，输入（HUAXUE）。 2、 开启1100各部件电源开关，等待自检完毕。 3、 单击下面的CAG Bootp Server→最小化。

4、 启动化学工作站。单击桌面上Instrument 1 Online ,显示主机各单元图标画面。 5、 单击泵图标→Setup Pump （1）设置泵参数：5ml/min

一些仪器操作规程1

（2）打开Purge阀（逆时针2—3圈）排气泡，平时常用此仪器需2—3分钟，不常用时需时间稍长些。

（3）开泵：单击泵图标，在图标上选Control→Pump→On，击OK，观察无气泡止。 （4）降流量=1ml/min

（5）关闭Purge阀（顺时针） 二、方法编辑：

1、在Method and Run Control界面下，单击Method→Edit Entire Method,在该界面下四项都选中，击OK。

（1）在Method Comments下面方框中输入方法描述（如：This Method is for trainning）,击OK。

（2）在泵参数设置（Setup Pump）界面输入泵参数，单击OK。

（3）在柱温箱参数设置（Column Thermostat Method）界面选Not Control→OK。 （4）在检测器参数设置（VWD Signal）界面输入波长及响应时间。 2、在Signal Details: Instrument 1编辑界面击OK。

3、在积分参数设置（Edit Integration Events）界面击OK。 4、在Specify Report界面击OK。 5、在Instrument Curves界面击OK。

6、在Run Time Checklist 编辑界面选Data Acquisition和Standard Data Analysis击OK。 7、方法保存：

击Method→Save Method As 输入存盘方法文件名（扩展名为“ .m”）→确定→OK。 三、运行样品：

1、打开Purge阀。

2、运行Instrument菜单下的System On。 3、待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。

4、单击View→Online Signals→Signal Window 1,打开信号监控窗口。

5、单击该窗口的“Change” 钮，进入信号选择窗口，选择需要监控的信号后，单击“Add”钮，然后击OK。

6、待信号稳定后，单击信号窗口的“Balance”钮，调整零点。

7、单击Run Control菜单→Sample Information,进行样品信息编辑。编辑完后，击OK。 8、进样分析：

开始进样，把取好样的注射器插入进样口，推针，扳动手动进样阀至Inject位置，拔出注射器。

四、打印谱图：单击“Print”按钮打印。

五、关机：单击菜单→Instrument→System off →关工作站→击下边CAG Bootp Server→关闭，再将主机各部件电源开关关掉，最后关计算机。 窗体底端

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