微生物数量统计实验

海南热带海洋学院

xxxxxxxxxxxxx 学院 xxxxxx级 xxxxxx 专业《 分子生态学》试卷

2015 ——2016学年度第二 学期期末考试 （B）卷

注意事项：

1、考前请将密封线内填写清楚

水中微生物数量统计

单位：xxxxxxxxxx 作者：xxx 学号：xxxxxx

摘 要：水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判

断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标［6］。水中微生物的主要来源是：

： 级 班 ：线 业 专封 密 卷 ：试号 学 ： 名 姓 2、所有答案请直接写在试卷上（或答题纸上） ［1］

3、考试形式：开（闭）卷

水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。4、本试卷共 1 大题，满分100分，考试时间 240分钟 我国饮用水卫生标准规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得超过100个。所谓细菌总数，指1mL水样中所5、评分一律加分，不写减分

含的细菌菌落的总数。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利

题号 一 二 三 四 五 六 总分 核分人 复查人 用培养基制作平板

［2］

。按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌数对照国家饮用水标准来判断水质

［3］

。对自

来水用平板菌落技术测定细菌总数，通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其得分 平均值得到，自来水中细菌总数为 13/mL。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意

义，同时也是评价水质状况的重要指标。

得 分 关键字 ： 自来水、平板菌落计数技术、乳白色菌、细菌总数、灭菌 一、论文题（本题共1小题，每小题100分，共100分）

评卷人 Statistics on the number of microorganisms in water

在下列三个题目中任选一个题目，完成不少于1500字的论文。

Abstract:. Water is the source of life, human life can not live without water environment, water quality plays a vital role

①从中国知网上查询两个关键词：其中一个为物种名词；一个为基因名称，或实验方法in people's lives, and to determine the water quality standards, the number of microorganisms in the water, the type is 名词，或分析方法名词，或其它分子生态学专业名词。至少选择最新的10篇文献，按照论文essential. Microbiological examination of tap water is of great significance to ensure the safety of drinking water and control of infectious diseases, and is also an important indicator to evaluate the quality of water［6］

的标准格式进行综述，正文不得少于1500字。

. The main source of microorganisms in water is: water nature water organisms (such as the photosynthetic algae), from soil runoff, rainfall, ②根据自助设计性实验《水中微生物数量统计》的数据，查阅相关文献，按照标准研究and external bacteria and pollutants from sewage and other human and animal excreta [1]. Water mainly from human and 性论文格式，完成论文，正文不得少于1500字，参考文献不得少于5篇。

animal pathogens of infectious waste. Our drinking water health standards (GB5749-85) provides the total number of ③论述参观荔枝沟自来水厂体会，请用分子生态学专业知识进行表述。

bacteria per milliliter of water at 37 ℃ for 24h no more than 100. The so-called total number of bacteria, water samples that contained 1mL of the total number of bacterial colonies. It is generally the ordinary beef extract peptone agar in ensuring a sterile environment, to take water samples produced by medium plate. Colony counting method by counting the bacteria measured by the number of experiments were to determine the water quality of national drinking water standards [2]. With a plate of water measured by total number of bacteria colonies, by observing the results are as follows: observed under a microscope and a wide range of large colonies, the mean value obtained, the total number of bacteria in tap water was 765/mL. Microbiological examination of water, ensuring the safety of drinking water and control of infectious diseases is of great significance, but also an important indicator of water quality evaluation.

Key words: Flat water ; colony counting techniques ; agar colony white; Total bacterial count; sterilization

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命题人：xxx审核人： xxxx

前 言：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数［4］。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。除采用平用天平称量牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0 g，NaC,5.0 g 置于烧杯中。 1.2.3.2溶化

在上述烧杯中加入1000mL蒸馏水，然后，在石棉网上加热，并用玻璃棒搅拌直至沸腾2分钟。 1.2.3.3调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加 ： 级 班 ：线 业 专封 密 卷 ：试号 学 ： 名 姓 板计数技术测定水中细菌总数外，现在已有许多种快速、简便的微生物检测仪或试剂纸等也用来测入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.4～7.6。反之，用1mol/L 定水中细菌总数[5]。

HCl调节。 1 材料与方法

1.2.4 细菌总数测定

1.1 材料、试剂与仪器

1.2.4.1 加水：灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中，共做2个培养皿。 1.1.1 实验的时间与地点：2016年4月5日———热带海洋学院8栋310实验室 1.2.4.2 加培养基：分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的普通营养琼脂培养基，并立即在

1.1.2 材料：自来水、学校人工湖水（图书馆旁）

桌上作平面摇动，使自来水水样与培养基充分混匀。

1.1.3 试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1moL/LNaOH、1moL/LHCL、灭菌水

1.2.4.3 空白对照：另取一空的灭菌培养皿，不加水样，直接倾注普通营养琼脂培养基15mL，作

1.1.4 仪器：高压蒸气灭菌锅、培养皿、三角烧瓶、天平、牛角匙、pH试纸（pH5.5-9.0）、麻绳、空白对照。

牛皮纸、量筒、玻璃棒、电热炉、称量杯

1.2.4.4 培养计数：待培养基凝固后，倒置，放于37℃恒温箱中，培养24小时，然后进行菌落计

1.2 实验方法

数。两个平板的平均菌落数即为1mL自来水的细菌总数。

1.2.4.5取人工湖水水样，一次稀释10-1 、10-2、10-3，3个浓度。对于每个浓度，取1ml稀释

1.2.1 灭菌［7］

液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒置培养1.2.1.1灭菌物品的放入：首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面

在37℃的温箱24h，计算平皿的细菌总数。

与三角搁架相平为宜。放回内锅层,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、吸管。加盖，2 结果 并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。

2.1 实验数据

1.2.1.2 高压蒸气灭菌锅的调节：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，

表1 自来水中菌落数实验数据

关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，通平板序号 1 2 细菌平均数（1mL）

过高压蒸汽灭菌锅上的按钮调节压力、温度和时间，维持压力至所需时间。本实验用菌落数目（个）

32

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0.1MPa,121℃,20min灭菌。灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力

表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 表2 学校人工湖水细菌数实验数据 1.2.2 水样的采取

稀释度 10-1 10-2 10-3 先放开水龙头使水流5min后，用灭菌后的三角烧瓶接取水样，迅速地进行分析。 平板序1 2 1 2 1 2 1.2.3 制备普通营养琼脂培养基［6］ 号 1.2.3.1称量

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命题人：xxx审核人： xxxx

细菌数 细菌总数（个/mL）

365 350 40 32 5 4 准。

3.2 讨论

由于该实验存在着不准确的因素比如在数菌落时，对于一些形态较小的菌落，我们就忽略不计。菌落太小且又处于培养基内部这样就不能观察到菌落从而影响结果，又如在培养过程中由于细菌之间的相互抑制也会使计数菌落减少［10］。因此，只有我们在不需要精确的情况下才可使用此方法。 264个/mL ： 级 班 ：线 业 专封 密 卷 ：试号 学 ： 名 姓 根据国家卫生标准可饮用水中的细菌个数为每毫升100个，而此自来水中的细菌个数为35个，低虽然水中存在大量的细菌且种类繁多，但由于牛肉膏蛋白胨所提供的生长条件的限制，培养基中所于国家标准，故该自来水水质合格。而学校人工湖水中细菌个数为264个，远超过国家卫生标准，得的细菌群落较单一为大肠杆菌，呈圆片状［6］。本实验的成败在于灭菌、无菌操作技术、培养基的所以此水质不可饮用。

温度等方面是否操作正确，所以，今后要更加注意其方法及原理。

2.2菌落记数方法［6］

4 实验注意事项

（1）每个实验组的菌落数减去对照组的菌落数，所得值相加除以2，就是菌落数的平均数

本实验成功的关键在于：

（2）先计算相同稀释度的平均菌落数，若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，（1）实验时，应避免杂菌的污染，操作要规范，如接自来水时一定要让自来水流5min，然后再采而应以片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其集水样。

余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该（2）向培养皿中倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基时应降温至45℃，以免温度过高烫死细菌。 稀释度的平均菌落数。

（3）倒置培养基前一定要将自来水摇匀，否则会影响观察的效果，计数比较难。

（3）首先选择平均菌落数在30～300之间的，则只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，（4）培养基一定要倒置，这样绝大多数的细菌着生在培养基表面。这是由于菌种在固体培养基上则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的菌落总数。

借助重力作用而形成的，有利于菌落计数。

（4）若有两个稀释度的平均菌落数均30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比 值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数。

（5）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。

参考文献

（6）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。

[1]陈声明 刘丽丽.《微生物学实验研究方法》.北京：人民教育出版社，1982 （7）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀[2]沈萍 陈向东等.《微生物学（第二版）》.北京：高等教育出版社.1999 释倍数。

[3]李根生.《干燥培养基恩德制造及应用》.上海：上海科学技术文献出版社.1994 3 结果分析与讨论 [4]郝士海.《现代细菌学培养基和生化试验手册》.北京：中国科学技术出版社.1992 3.1 分析

[5]罗雪云等.《食品卫生微生物检验标准手册》.北京：中国标准出版社.1995 （1）由于国家饮用水标准规定，饮用水中细菌总数每毫升不超过100个。但是实验组2中的菌[6]沈萍 陈向东等.《微生物学实验（第四版）》.北京：高等教育出版社.1999 落数目远远少于100个，可能是由于倒培养基时温度较高杀死了部分的细菌［9］，使得实验的结果有[7]周德庆等.《微生物学实验教程》.上海：复旦大学出版社.1993 较大的出入。

[8]刘志恒.《现代微生物学》.北京：科学出版社.2003.6

（2）依据实验结果可判断实验室中的自来水符合国家卫生标准的要求。而人工湖水远超过此标

[9]薛泉宏 和文祥.《普通微生物学》.北京：世界图书出版社.2007 [10]诸葛健 李华钟.《微生物学》.北京：科学出版社.2002

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