实验四 茶叶中咖啡碱含量的测定(3学时)

1、掌握咖啡碱的分离分析方法。2、理解实验特征与一般原理。

实验四 茶叶中咖啡碱含量的测定（3学时）

一、实验目的

1、掌握茶氨酸的分离分析方法。

2、理解实验特征与一般原理。

二、实验原理

在茶叶水浸出物中除去叶蛋白、茶多酚等物质后,留下的生物碱其测定波长为274nm者,均称茶叶咖啡碱。

茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后,用特定波长测定其含量。

三、实验仪器和用具

1、仪器：紫外分光光度仪；分析天平，感量0.0001g。

2、试剂和溶液：所用试剂均为分析纯(AR)，水为蒸馏水。

碱性乙酸铅溶液: 称取50g碱性乙酸铅(HG 3—1396—81),加水100mL,静置过夜。 盐酸(GB 622—77): 0.01N溶液,取0.9mL盐酸,用水稀释1L,摇匀。

硫酸(GB 625—77): 9N溶液,取硫酸250mL,用水稀释至1L,摇匀。

咖啡碱标准液: 称取100mg咖啡碱(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液,准确吸取5mL加水至100mL作为工作液(1mL含咖啡碱0.05mg)。

四、操作方法

1、取样：按GB 8302—87《茶 取样》的规定取样。

2、试样的制备：按GB 8303—87《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。

3、测定步骤：

（1）试液的制备：称取 3g 准确至0.00 1g )磨碎试样(4.2)于500m L锥形瓶中，加沸蒸馏水450m L，立即移人沸水浴中，浸提45 min(每隔10 min摇动一次、。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移入500 ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2-3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。

（2）测定：用移液管准确吸取试液(4.3.1)20mL移入250mL容量瓶中,加入10mL0.01N盐酸(3.2)和2mL碱性乙酸铅溶液(3.1),用水准确稀释至刻度,充分混匀,静置澄清过滤,准确吸取滤液50mL,注入100mL容量瓶中,加入0.2m19N硫酸溶液(3.3),加水稀释至刻度,混匀,静置澄清过滤。用10mm比色杯,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。

（3）咖啡碱标准曲线的制作：分别吸取0、5、10、15、20、25、30mL咖啡碱工作液(3.4)于一组100mL容量瓶中,各加入4.0mL盐酸溶液(3.2),用水稀释至刻度,混匀,用10mm石英比色杯,在紫外分光光度仪上选择狭缝0.1～0.18mm,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。

1、掌握咖啡碱的分离分析方法。2、理解实验特征与一般原理。

五、结果计算

1、计算方法和公式：茶叶中咖啡碱含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: 咖啡碱(％)＝C L110050 10001025

M m 100

式中:C——根据试样测得的吸光度(A),从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,mg/mL;L1——试液总量,mL;M——试样用量,g;m——试样干物质含量百分率。

六、实验报告

a. 使用的方法;b. 测定的结果(取小数点后一位);c. 本标准中末规定的或另加的操作;d. 试样的名称和产地;e. 试验日期,操作人员。

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